Polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) tuberkulozei

Tuberkuloze ir viena no bīstamākajām slimībām, no kurām cilvēce cieš simtiem gadu. Lai gan zinātnieki spēja identificēt izraisītāju un izgudrot antibiotikas, lai to novērstu, ārstēšana ne vienmēr ir veiksmīga. Galvenais iemesls ir ilgs latentās vai latentās slimības veids, kas var ilgt vairākus gadus. Novēlota diagnoze ievērojami samazina pacienta atgūšanas iespējas un pilnīgu dzīvi.

Kas ir PCR?

Mycobacterium tuberculosis noteikšanai organismā jau vairāk nekā simts gadus veiksmīgi izmantots Mantoux tests. Citas metodes ir labi pierādījušas: bakterioloģiskā kultūra mākslīgā vidē, uztriepes mikroskopija, ELISA. Tomēr liels skaits sarežģījumu un viltus pozitīvu rezultātu, kā arī dažu metožu ilgums prasīja diagnostikas metodoloģijā ieviest jaunas tehnoloģijas. Milzīgs sasniegums mikrobioloģijas jomā bija PCR analīzes izstrāde tuberkulozei. Jau vairākus gadu desmitus tā ir parādījusi savu efektivitāti un to plaši izmanto dažādu tuberkulozes formu diferenciāldiagnozei.

PCR analīze tuberkulozes vai polimerāzes ķēdes reakcijai ir baktēriju vai to fragmentu DNS noteikšanas metode, kas balstās uz nukleīnskābes molekulu pieaugumu fermenta DNS polimerāzes darbībā. Lai iegūtu pozitīvu rezultātu, pietiek ar tikai vienu patogēnās DNS molekulu, tāpēc šī metode tiek uzskatīta par ļoti jutīgu. OCP diagnostika tuberkulozē ir efektīvāka nekā mikobaktēriju sēšana mākslīgā vidē, jo, atšķirībā no kultūras metodes, tā ļauj atšķirt savvaļas un vakcīnas celmus, kas vakcinēti ar BCG. Tas novērš viltus pozitīvus un padara diagnozi precīzāku.

PCR priekšrocības

PCR diagnostika tuberkulozei ļauj noteikt Koch bacillus jebkurā organisma bioloģiskajā vidē, nosakot to kvantitatīvo sastāvu pat slimības sākumposmā, kad mikobaktērijas atrodas hibernācijā. Slimības diagnostika latentajā fāzē ļauj savlaicīgi uzsākt profilaktisko ārstēšanu, lai novērstu plaušu iekaisuma fokusu attīstību un komplikāciju parādīšanos citos orgānos un sistēmās. Turklāt tuberkulozes PCR testam ir vairākas priekšrocības:

• augsta specifika - 90-100%;
• liels ātrums - no 4 stundām līdz 2 dienām;
• augsta jutība, īpaši imūndeficīta gadījumā;
• diferenciāldiagnoze.

Metodes galvenā priekšrocība ir tā, ka CRC tuberkulozes diagnoze bērniem ļauj atšķirt slimības izplatīto formu no ierobežotā fokusa, pat ar citu testu negatīviem rezultātiem. Diferenciālā testēšana ļauj izvēlēties pareizo ārstēšanas režīmu un palielināt terapijas efektivitāti.

Liela analīzes specifika tiek panākta, novēršot krusteniskās reakcijas ar citām nukleīnskābes molekulām, un augsta jutība ļauj noteikt mikobaktērijas pat nelielā savāktā materiāla apjomā. Vislielākā ticamība ir tuberkulozes krēpu PCR metodei, tās specifiskums sasniedz 100% salīdzinājumā ar citu bioloģisko materiālu izpēti.

Īpašs PCR mehānisms sniedz plašas iespējas, lai atklātu Koch sticks imūnkompromitētiem pacientiem. Saskaņā ar analīzes metodi reakcija atklāj antigēnus, tāpēc nav svarīgi, vai organisms ražo antivielas pret patogēnu, vai ne. Tādējādi ir iespējams diagnosticēt slimības ekstrapulmonālās formas un progresīvus gadījumus pacientiem ar imūnās sistēmas neprecizitātēm, kas nav iespējama, izmantojot citas metodes.

Metodes trūkumi

Neskatoties uz daudzajām priekšrocībām un lielo jutīguma pakāpi, PCR tuberkulozei var dot nepatiesu negatīvu rezultātu. Tā kā diagnozei tiek izmantots ļoti neliels daudzums biomateriālu, tas, ka šūnu vai iekaisuma fokusa patogēns “neļauj”, nav izslēgts un netiek izlaists ārpusē.

Šīs metodes jutīgums bērniem ir 25-80%. Piemēram, randomizētā pētījumā pacientiem ar klīniski pierādītu diagnozi, PCR asinsanalīze tuberkulozei radīja pozitīvu rezultātu tikai 50% pacientu. Šajā sakarā, pārbaudot bērnu par patogēnu mikobaktērijām, nav iespējams vienu diagnostikas metodi aizstāt ar citu. Lai pilnībā pārbaudītu infekcijas neesamību, ir nepieciešams veikt visaptverošu pētījumu vairākos veidos vienlaicīgi.

Savākšanas process

Galvenais nosacījums PCR diagnostikas drošībai ir atbilstība bioloģisko šķidrumu savākšanas noteikumiem analīzei. Piesārņots vai nepareizi savākts materiāls var izraisīt nepareizus rezultātus. Visbiežāk ir krēpu, asins un urīna analīze, bet dziļāka diferenciāldiagnoze, jūs varat ņemt paraugus no kuņģa, sinoviālā šķidruma, smadzeņu šķidruma, bronhu skalošanas šķidruma, spermas, prostatas sekrēcijas.

Urīna PCR tuberkulozei tiek ņemts no rīta pēc ārējās dzimumorgānu higiēnas, urinējot sterilā traukā. Procedūras laikā ir svarīgi nepieskarties konteinera iekšējām sienām, lai novērstu trešo personu mikroorganismu iekļūšanu. Sievietēm, kas dzīvo parastā seksuālajā dzīvē, noteikti jānovieto tampons vagīnā, lai izvairītos no trešās puses atbrīvošanas.

No vakara tukšā dūšā tiek ņemts asins tests, un tuberkulozes krēpu PCR var izdarīt jebkurā diennakts laikā ar obligātu iepriekšēju mutes dobuma higiēnu. Tas ir nepieciešams, lai noņemtu pārtikas atliekas, kas var iekļūt traukā. Izspiežot krēpu, ir svarīgi novērst siekalu un gļotu iekļūšanu no deguna gala, kas var traucēt analīzes datus.

Kuņģa satura izpēte tiek veikta slimnīcā agri no rīta, bet nakts laikā norīts krēpas ir kuņģī. Lai atklātu mikobaktēriju tuberkulozi, šī metode padara trīsējus sējus, kas, visticamāk, ļauj izolēt Koch bacillus.

Dekodēšanas rezultāti

PCR kvalitatīvā analīze dod divu veidu rezultātus "atklāti" vai "nav atklāti". Tie nozīmē attiecīgi pozitīvu un negatīvu spriedumu. Atbilde "atklāta" nozīmē, ka infekcijas ierosinātāja DNS atrodas testa paraugā un ar 97% varbūtību organisms ir inficēts ar tuberkulozi. Negatīvs rezultāts norāda, ka Koch trūkst DNS bioloģiskā materiāla paraugā, un dod 97% iespēju, ka organismam nav daudz mikobaktēriju, un 60%, ka persona nav inficēta.

Vislielākā specifika tuberkulozes diagnozei ir asins analīzes un krēpas. Ar pozitīvu rezultātu viņi norāda uz organisma infekciju, kas prasa steidzamus terapeitiskus pasākumus. Citu biomateriālu pētījumi var liecināt par slimības gaitu, bet tikai uz svešzemju baktēriju klātbūtni. Tas notiek, ja persona ir slimības nesējs, bet ne izplatīs infekciju vidē un neinficē veselus cilvēkus.

Kvantitatīvā PCR analīze tiek veikta retāk, un ārstējošais ārsts nodarbojas ar tā rezultātu dekodēšanu. Pētījuma indikatori tiek izmantoti, lai noteiktu slimības aktivitāti un ķermeņa bojājumu pakāpi. Pamatojoties uz iegūtajiem datiem, speciālists var noteikt ārstēšanas efektivitāti un, ja nepieciešams, pielāgot terapijas shēmu.

Tuberkuloze vienmēr ir bijusi un joprojām ir viena no nopietnākajām problēmām visas cilvēces veselībai. Mūsdienu diagnostikas metodes var noteikt slimību agrīnā stadijā, lai sāktu ārstēšanu laikā. Tuberkulīna tests, uztriepes mikroskopija, baktēriju kultūra mākslīgajos barotnēs ir pierādījusi tuberkulozes laboratorijas diagnostiku. Tomēr ilgi gaidot rezultātus un palielinot nepareizu pozitīvu nolasījumu biežumu, tie kļuva novecojuši un izvirzīti priekšplānā progresīvākas tehnoloģijas. PCR analīze ir ļoti specifiska un ļoti efektīva metode tuberkulozes diagnosticēšanai. Viņa rezultāti ir visdrošākie starp visām ierosinātajām laboratorijas metodēm, lai atklātu Koch sticks. Tas ļauj ne tikai izdarīt galīgo spriedumu, bet arī veikt nepieciešamo diferenciālo diagnozi.

Tuberkulozes PCR diagnoze bērniem un pieaugušajiem: indikācijas

Pasaules Veselības organizācija pirms 20 gadiem atzina, ka tuberkulozes izplatīšanās ātrums nav kontrolēts un sasniedzis epidēmijas mērogu. Kopš tā laika situācija nav uzlabojusies. Katru gadu tiek diagnosticēti vairāk nekā miljons slimības gadījumu, no kuriem gandrīz ceturtā daļa ir letāla. Pēdējā desmitgadē biežums bērnu vidū ir palielinājies, vairums slimības formu nav piemērotas standarta antibiotiku terapijai.

Šodien viens no globālajiem uzdevumiem medicīnā ir tādu diagnostikas metožu izstrāde, kas ļaus identificēt patoloģiju pirms izteiktu klīnisko simptomu rašanās. Viens no tiem ir polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) tuberkulozei, kas palīdz atklāt Koch slimību izraisošos stieņus asinīs, krēpās un citos bioloģiskos šķidrumos.

Tuberkulozes diagnostika

Skrīninga testi ir vērsti uz pacientu, tuberkulozes nesēju un infekcijas izplatības novēršanu sabiedrībā. Bērniem līdz 14 gadu vecumam Mantoux tests tiek plaši izmantots. Tas ir imunoloģisks tests, kurā tuberkulīna deva tiek injicēta subkutāni - sarežģīts vairāku mikobaktēriju veidu ģenētiskā materiāla maisījums. Izteiktās reakcijas parādīšanās norāda uz aktīvo infekcijas procesu.

Profilaktiskajai pārbaudei pieaugušajiem, izmantojot fluorogrāfiju vai rentgenstaru. Šīs metodes palīdz vizualizēt patoloģiskos bojājumus plaušu audos. Tomēr tas rada grūtības diferencēt tuberkulozi no citas organiskas patoloģijas (ļaundabīgi un labdabīgi audzēji, iekaisuma procesi, parazītu invāzijas, profesionāls plaušu bojājums).

Lai noskaidrotu patoloģiskā fokusa struktūru un lielumu, var būt nepieciešami papildu instrumentālie pētījumi:

• mērķtiecīga radiogrāfija;
• datortomogrāfija;
• magnētiskās rezonanses attēlveidošana.

Tuberkulozes diagnostikas metodes

Šaubu gadījumā un atbilstošas ​​terapijas iecelšanai ir vajadzīgas precīzākas diagnostikas metodes, kas ļauj izolēt patogēnu. Lai apstiprinātu tuberkulozes plaušu formu, ilgstoši tiek izmantota krēpu mikroskopiskā un bakterioloģiskā izmeklēšana.

Pēdējos gados biežāk sastopami dažādi orgāni un sistēmas - nieres, kauli, zarnas, āda - mikobaktēriju sastopamība. Lai identificētu šīs tuberkulozes formas, var izmantot ultraskaņas pārbaudes, urīna un izkārnījumu kultūru, endoskopijas izmeklējumus.

PCR diagnostika tuberkulozei palīdzēs apstiprināt Koch klātbūtni asinīs, kā arī tās jutību pret noteiktām zālēm. Šī ir ļoti efektīva metode, kas balstīta uz baktēriju ģenētiskā materiāla noteikšanu dažādos bioloģiskos šķidrumos.

Specifiskums un norādes

Polimerāzes ķēdes reakcija ir ļoti jutīga mikrobioloģiskā diagnostikas metode, kas balstās uz ģenētiskās inženierijas principiem. Lai apstiprinātu patogēna klātbūtni bioloģiskajā materiālā, pietiek ar to noteikt unikālu nukleīnskābes fragmentu. PCR tuberkulozei var noteikt baktērijas asinīs, krēpās, urīnā.

Šobrīd izstrādātas vairākas analīzes metodes. Vispopulārākie no tiem ir šādi:

• Reāllaika PCR;
• mikrofluīdu tehnoloģija;
• sekvencēšana un piroekvenēšana.

Reālā laika PCR

Laboratorijas visbiežāk izmanto reālā laika polimerāzes ķēdes reakciju, jo samazina viltus pozitīvo rezultātu skaitu, un pats analīzes process aizņem īsu laiku.

Ņemot vērā slimības slēpto formu lielo skaitu un standarta diagnostikas metožu neefektivitāti, PCR arvien vairāk tiek izmantots. Šīs analīzes mērķis ir parādīts:

• apzināt aizdomīgus apgabalus uz rentgena;
• šaubīgi tuberkulīna testa rezultāti;
• neiespējamība veikt krēpu mikroskopisku un bakterioloģisku analīzi cilvēkiem nopietnā stāvoklī;
• veikt ķirurģiskas iejaukšanās, ja ir nepieciešams ātri nodrošināt infekcijas trūkumu;
• fluorogrāfijas, rentgenstaru vai datortomogrāfijas izmantošanas nepieņemamība (piemēram, grūtniecēm un barošanai ar krūti, pārmērīga starojuma iedarbības gadījumos);
• aizdomas par ekstrapulmonālo tuberkulozi (ieteicams lietot ne tikai asinis, bet arī flegma).

Tuberkulozes PCR diagnostika sevi pierādījusi bērnu pārbaudē, jo trūkst papildu ekspozīcijas un ātru rezultātu.

Sagatavošanas un analīzes procedūra

Īpaša sagatavošanās asins PCR nav nepieciešama. Tomēr, lai izvairītos no asins paraugu ņemšanas sarežģījumiem un lai iegūtu augstas kvalitātes materiālus, jāievēro šādi vispārīgi noteikumi:

• analīze jāveic rītā ne agrāk kā 2 stundas pēc pamošanās;
• Tai būtu jāierobežo tauku un ceptu ēdienu uzņemšana dienā pirms asins paraugu ņemšanas;
• atturēties no ēšanas, tējas un kafijas 8-9 stundas, tas ir atļauts dzert tīru ūdeni;
• Nedrīkst smēķēt vismaz 3-4 stundas.

Pastāvīgo medikamentu gadījumā (hormoni, antikoagulanti, pretiekaisuma līdzekļi, antibiotikas, asins atšķaidītāji) par to ir jāinformē laboratorijas palīgs.

Pēc krēpu ievadīšanas jums jātīra zobi un vairākas reizes izskalojiet muti. Savākt materiālu sterilā traukā. Lai iegūtu labākus rezultātus, vakarā var lietot atsperojošu vai mukolītisku līdzekli.

Pati diagnoze sastāv no vairākiem posmiem.

Žogu materiāls. To var veikt laboratorijā un attālināti. Daži materiāli, ko pacients savāc neatkarīgi (urīns, flegma).

Nukleīnskābju struktūras iznīcināšana (DNS un RNS molekulu denaturācija). Lai to izdarītu, testa materiāls tiek sasildīts līdz 98 grādu temperatūrai un tiek turēts vairākas minūtes. Rezultātā dubultā spirāles atloka, veidojas viendaļīgas molekulas.

Rūdīšana Pēc primera pievienošanas (īsa nukleīnskābes daļa), temperatūra samazinās par vairākiem grādiem, aktivizējas polimerāze.

Atzīšana. Temperatūra tiek sasniegta optimālā līmenī, enzīmu aktivitāte sasniedz maksimumu un otrā ķēde ir pabeigta saskaņā ar Chargaff noteikumu par komplementaritāti.

Lai pabeigtu pētījumu, ir nepieciešams sintezēt nepieciešamo skaitu DNS molekulu - aptuveni 50 ciklu iepriekšminētās reakcijas. Tas aizņem apmēram 2-3 stundas. Pozitīvs reakcijas rezultāts ne vienmēr norāda uz aktīvo slimības stadiju, bet gan liecina par mikroorganisma klātbūtni organismā.

Metodes priekšrocības un trūkumi

Salīdzinot ar citām mikrobioloģiskajām metodēm, PCR nav nepieciešams ilgs laiks, lai noteiktu Mycobacterium tuberculosis, izmantojot PCR, rezultātu var iegūt testēšanas dienā.

Vēl viena priekšrocība ir analīzes augsta specifika, kas ļauj konstatēt patogēna klātbūtni ar precizitāti 90-95% gandrīz jebkurā biomateriālā (asinīs, urīnā, izkārnījumos, smadzeņu šķidrumā, krēpās, bronhu pietvīkumā).

Tomēr metodei ir vairāki trūkumi:

• samērā liels viltus pozitīvu rezultātu (līdz 15%) īpatsvars, kas saistīts ar dzīvu mikroorganismu noteikšanu;
• dažos gadījumos jūs varat izlaist slimības faktu, jo Mycobacterium tuberculosis bieži tiek pakļautas mutācijām un to ģenētisko materiālu izmaiņām;
• zema efektivitāte cilvēkiem ar imūndeficītu;
• augstām pētniecības izmaksām, nepieciešamībai pēc dārgām iekārtām un reaģentiem.

Ko var aizstāt?

Ņemot vērā tuberkulozes infekcijas veidu dažādību, precīzāku diagnozi un ārstēšanas izvēli, ir nepieciešams apvienot vairākus diagnostiskos pētījumus:

Obligāta analīze bērniem ir Mantoux tests. Ja tuberkulīna ievadīšana (mikobaktēriju ģenētiskais materiāls) ir izteikta reakcija, var pieņemt, ka tas ir inficēts ar tuberkulozes bacillus.

Lai vizualizētu patoloģisko fokusu, var izmantot rentgena metodes. Ekstrapulmonālās tuberkulozes diagnozē tiek izmantotas endoskopiskās metodes ar vienlaicīgu biopsiju:

• bronhoskopija palīdz identificēt balsenes, trahejas, bronhu bojājumus;
• kolonoskopija - zarnas;
• cistouretroskopija - urīna sistēmas orgāni;
• histeroskopija - sieviešu dzimumorgāni. Šīs metodes nav specifiskas, lai precīzi noteiktu diagnozi, ir jānosaka patogēns.

Vispārējie klīniskie testi palīdzēs precīzāk noteikt ķermeņa stāvokli. Ir nepieciešama pilnīga asins analīze ar leikocītu formulu.

Neitrofilo leikocītu skaita pieaugums ar samazinātu limfocītu līmeni un eritrocītu sedimentācijas ātruma (ESR) pieaugums norāda uz aktīvo bakteriālās etioloģijas iekaisuma procesu. Lai izslēgtu urīna sistēmas orgānu bojājumus, izmantojot vispārēju urīna analīzi un sterilitātes kultūru.

PCR pašlaik ir pieejams lielākajā daļā privāto laboratoriju. Tas prasa ne tikai augsti kvalificētus speciālistus, bet arī dārgas iekārtas, lielu skaitu reaģentu. Tāpēc šīs metodes izmantošana ir ierobežota, neskatoties uz tās augsto precizitāti un specifiskumu.

PCR analīze tuberkulozes diagnostikai

Medicīna nekad nenonāk, un līdz šim veselības aprūpes nozares attīstība ļauj diagnosticēt un izārstēt daudzas iepriekš neietekmētas slimības. Ir arī slimības, ko nevar noteikt vizuālā pārbaudē. Tuberkuloze vienmēr ir bijusi to vidū. Tā ir bīstama infekcijas slimība, kas ietekmē plaušas, locītavas un kaulus un bieži vien izraisa nāvi pat mūsu dienās. Šīs slimības diagnostikas metodes ir uzlabotas, kas ļauj noteikt slimību agrākos posmos, kad tas ir ārstējams. Starp tiem ir ne tikai rentgena un mantoux testi, bet arī PCR tuberkulozei.

Tuberkuloze - kas tas ir

Agrāk tuberkulozi sauca par sausu slimību vai phthisis. Tā ir bakteriāla infekcija, kas visbiežāk ietekmē plaušas. Tās ekstrapulmonālās formas - kaulu un locītavu tuberkuloze, tuberkulārais meningīts - ir mazāk izplatīti un progresīvāki posmi. Šīs infekcijas slimības izraisītājs ir mikobaktērijas. Tuberkulozes bacillus sauc arī par Koch zizli.

TB infekcija ir ļoti lipīga, to pārnes ar gaisa pilieniem, klepus un šķaudot pacientu. Vienīgā aizsardzība pret šo slimību ir savlaicīga vakcīna. Tas neaizsargā pret infekcijām, bet neļauj bacilēm iekļūt organismā, lai izraisītu tuberkulozi.

Tuberkulozes formas

Slimība var rasties gan atklātā, gan slēgtā veidā. Atšķirības ir šādas:

• slēgta tuberkuloze ir asimptomātiska. Šādos apstākļos Koch zizlis krēpās nav iespējams atklāt, tāpēc inficētie nav bīstami videi. Šāda slimības gaita parasti neapdraud visvairāk inficēto, bet ir izņēmumi - vienā gadījumā desmit, slēgta tuberkuloze var nonākt atvērtā formā;
• ar atvērtu formu, mikobaktērijas, kas izraisa tuberkulozi, atrodamas pacienta siekalās un krēpās. Inficēts organisms rada lielu apdraudējumu sabiedrībai, pat izolēti. Parasti slimība vispirms skar plaušas. Ja tā nav diagnosticēta agri, tā var būt cita veida, piemēram, kaulu vai locītavu tuberkuloze.

Atklāto tuberkulozes formu diagnosticē dažādos veidos. Pacientam tiek veikta krūškurvja rentgena vai krūškurvja rentgenogramma, viņa bioloģiskā materiāla analīze vai Mantoux ādas tests. Nesen ir radusies cita metode, kas tiek uzskatīta par vienlīdz efektīvu - polimerāzes ķēdes reakcijas (PCR) analīze.

Ko nozīmē PCR

Medicīnas praksē šīs metodes diagnosticēšanas metodes vai ka slimība, atklājot tās DNS vai RNS cilvēka organismā, jau sen ir izmantotas. Tas ir tieši tuberkulozes PCR. Tā ir augstas precizitātes analīze asinīm vai citiem bioloģiskiem šķidrumiem, kas ļauj identificēt baktērijas ar minimālo koncentrāciju izvēlētajā materiālā, pietiek ar vienu šūnu. Pētījums tiek veikts, izmantojot īpašu polimerāzes fermentu.

Metodes priekšrocības

PCR ir diagnostikas metode, kas sevi parādījusi no labākās puses, tāpēc to bieži izmanto gan kopā ar citām metodēm, gan neatkarīgi. Tās priekšrocības:

• īsāko ražošanas laiku. Pētījums tiek veikts ātri, apmēram 5 stundu laikā, izmantojot PCR, var noteikt tuberkulozes bacillus klātbūtni pacienta bioloģiskajā šķidrumā. Tas jo īpaši attiecas uz gadījumiem, kad nepieciešams veikt tūlītēju ķirurģisku iejaukšanos, un pirms tam ir nepieciešama precīza diagnoze;
• Tā gadās, ka citas diagnostikas metodes pacientam ir kontrindicētas. Piemēram, rentgena starus nevar izdarīt ikviens. Turklāt attēls ne vienmēr ir iespējams veikt diagnozi, īpaši, ja slimība ir agrīnā stadijā. Izmantojot PCR metodi, patogēns tiek atklāts nekavējoties;
• Jebkura pacienta bioloģiskais šķidrums ir piemērots analīzei. Lai noteiktu plaušu un ekstrapulmonārās formas, tiek veikta urīna un siekalu PCR tuberkulozei. Pētījums tiek veikts arī, izmantojot pacienta mugurkaula šķidrumu, lai noteiktu tuberkulozo meningītu.
• Metode ir pilnīgi droša. Lai to veiktu, pietiek ar bioloģisko šķidrumu no pacienta. Tuberkulozes PCR diagnostika bērniem ir ērta un nekaitīga, jo rentgena izmeklēšana ir atļauta tikai no 18 gadu vecuma, un Mantoux tests dažkārt izraisa blakusparādības;
• PCR ir ļoti jutīga analīze. Tas ļauj identificēt Koch sticks ar minimālu mikobaktēriju koncentrāciju;
• Ar speciāla polimerāzes enzīma palīdzību slimība tiek diagnosticēta jebkurā stadijā, sākot no agra līdz progresīvai;
• šī metode ir efektīva slimības atkārtošanās diagnosticēšanai;
• Šī metode ir izrāviens, veicot precīzu diagnozi slimības sākumposmā. Tas ļauj sākt ārstēšanu pēc iespējas īsākā laikā un iznīcināt patogēnus, kad tie vēl nav atstājuši negatīvu ietekmi uz cilvēka ķermeņa orgāniem un sistēmām.

Kur veikt PCR analīzi attiecībā uz tuberkulozi

Lai gan tuberkulozes PCR analīze ir ļoti efektīva metode šīs slimības diagnosticēšanai, to reti izmanto atsevišķi. Parasti šī ir papildu metode tuberkulozes noteikšanai un to lieto reti. Fakts ir tāds, ka šī metode ir diezgan dārga.

Publiskajām klīnikām nav iespēju iegādāties speciālu aprīkojumu PCR analīzes veikšanai, un valdība neredz šī panta finansēšanas punktu, jo tuberkulozi var diagnosticēt citādi. Šādu pētījumu visbiežāk veic privātās klīnikās, kas var atļauties iegādāties nepieciešamo aprīkojumu.

Metodes trūkumi

Augstā cena nav vienīgais PCR trūkums. Papildus augstajām izmaksām, metodei ir citi trūkumi un trūkumi, piemēram:

• PCR tuberkulozei dod pozitīvu rezultātu pat pēc ārstēšanas, jo tā aizņem mirušās šūnas kā dzīvas baktērijas, tāpēc šī metode nav piemērota kā pacienta kontroles pārbaude, lai apstiprinātu viņa atveseļošanos;
• tuberkulozes bacilli mutē, un to DNS tiek modificēta, kas var ietekmēt rezultāta ticamību;
• PCR asins analīzes tuberkulozei reti tiek veiktas, jo Koch stieņu klātbūtne šajos bioloģiskajos šķidrumos ir ļoti grūti noteikt. Tas ir iespējams tikai pēdējos posmos vai sepsis. Parasti pacienta krēpu diagnosticē;

Jāatzīmē, ka visprecīzākais rezultāts ir tieši pacienta kuņģa satura savākšana. Ja ir aizdomas par plaušu tuberkulozi, krēpu kultūra būs visefektīvākais veids, kā diagnosticēt slimību. Ja pacientam ir ekstrapulmonāla forma, šajā bioloģiskajā vidē var nebūt baktēriju. Lai noteiktu kaulu, locītavu utt. Tuberkulozi, izmantojot PCR, nepieciešams cits bioloģisks šķidrums, piemēram, mugurkaula šķidrums.

Kā ir PCR tuberkulozei

Kā aprakstīts iepriekš, PCR analīzes būtība ir noteikt patogēna DNS pacienta bioloģiskajā šķidrumā, izmantojot polimerāzes reakciju. Metodes galvenie posmi:

1. Bioloģisko materiālu paraugu ņemšana. PCR ir ne tikai hemotest - pētītā biomasa var būt siekalas, urīns, cerebrospinālais šķidrums, bronhu mazgāšanas šķidrums, kuņģa saturs, krēpas.
2. Pēc tam biomasa ir pakļauta augstām temperatūrām, lai iznīcinātu patogēna DNS struktūru.
3. Pēc tam temperatūra pakāpeniski samazinās, un iznīcināto DNS elementu piestiprina grunts.
4. Saskaņā ar molekulārās sintēzes rezultātiem, kas aizņem apmēram 30 ciklus, tiek konstatēta noteiktu patogēno baktēriju celms vai tā nav.

Šī analīze prasa labu finansējumu, tāpēc PCR netiek veikta ļoti bieži. Tomēr šī metode nav vienāda, ja citas diagnostikas iespējas ir aizliegtas vai ārkārtas gadījumā, kad nav laika gaidīt rezultātu.

Apkopojot

Nobeigumā varam izdarīt šādus secinājumus:

• PCR ir ļoti precīza analīze, kas dažu dienu laikā pēc infekcijas var noteikt tuberkulozi;
• šī analīze tiek veikta 3,5 - 5 stundās, tāpēc gadījumā, kad rēķins iet uz pulksteni, tas ir neaizstājams;
• tā ir droša metode, kurai nav blakusparādību;
• To lieto, ja citas diagnostikas metodes ir parādījušas nekonsekventus rezultātus vai to lietošana ir kontrindicēta.

Tomēr PCR reti tiek veikts, jo tā ir dārga analīze, kas prasa speciālas iekārtas uzstādīšanu. Turklāt tas ne vienmēr ir informatīvs, tāpēc eksperti izmanto šo metodi, lai atklātu tuberkulozi.

Tuberkulozes PCR analīze (diagnoze)

Tuberkuloze vai patēriņš - viena no populārākajām 21. gadsimta infekcijas slimībām. Tās patogēni ir īpaši mikrobaktērijas - Koch sticks.

Slimība izplatās ne tikai uz plaušām, bet arī uz smadzenēm, gremošanu, locītavām vai mugurkaulu, urīnceļu sistēmu un ādu.

Saskaņā ar PVO datiem 10 miljoni cilvēku katru gadu cieš no tuberkulozes, no kuriem 3 miljoni ir letāli.

Situācija ir īpaši skumja NVS valstu teritorijā, šeit tuberkulozes epidēmijas notiek periodiski. Krieviju, Kazahstānu, Ukrainu vada skumjš novērtējums par šīs infekcijas izplatīšanos.

Infekcija ir viegli pārnēsājama pa gaisa pilieniem vai caur gremošanas sistēmu, ietekmē dzīvībai svarīgos orgānus, kā arī spēj ātri pielāgoties polimēru zālēm un ķīmijterapijai.

Viens no galvenajiem faktoriem veiksmīgai tuberkulozes ārstēšanai ir savlaicīga infekcijas atklāšana.

Diagnostikas metodes

Cilvēce ir izgudrojusi daudzas metodes bīstamas slimības atpazīšanai. Tuberkulozes diagnostika ir sadalīta instrumentālajā un laboratorijā.

Pirmajā gadījumā - asins analīzes par tuberkulozi, kā arī krēpu, urīnu.

Otrā grupa ir pētījums, kurā izmanto rentgenstaru un endoskopiju. Savukārt instrumentālās metodes tuberkulozes diagnosticēšanai ir radiācija un ķirurģija.

Radiācijas metožu veidi slimības atrašanai

• Fluorogrāfija ir metode, lai diagnosticētu slimību, kas pazīstama visiem NVS iedzīvotājiem. Izmantojot rentgenstarus, tiek pārbaudītas plaušas un limfmezgli.
• Krūškurvja rentgenogramma - līdzīga fluorogrāfijai, bet labāka infekcijas noteikšanas metode. Attēlu iegūst sīkāk un divās prognozēs, bet šī procedūra ir aptuveni sešas reizes dārgāka. Parasti to lieto pēc nopietnām aizdomām par slimību.
• Datorizētā tomogrāfija tiek veikta kā papildu diagnoze, ko izmanto arī pēc laba iemesla infekcijas klātbūtnei.

Diagnostikas ķirurģiskās metodes ietver bronhu endoskopiju, kā arī mediastinoskopiju un torakokoskopiju.

Pirmā metode ir pētīt plaušu bronhu koku, izmantojot "zondi" šajā orgānā. Atlikušās divas metodes ļauj izpētīt plaušu pleiras daļu ar krūtīm.

Visas trīs metodes ir nopietna ķirurģiska iejaukšanās un visbiežāk tiek izmantotas slimības progresēšanas procesā.

Laboratorijas testi ietver:

• Tuberkulozes speķu analīze.
• Mikroskopiskā pārbaude.
• Tuberkulozes PCR diagnoze

Kas ir PCR diagnoze?

Viena no progresīvākajām infekciju speciālistu laboratorijas diagnostikas metodēm sauc par polimerāzes ķēdes reakciju.

Šo metodi izstrādāja slavenais ASV zinātnieks Carrie Mullis 1983. gadā, par kuru viņš ieguva Nobela prēmiju.

PCR analīze ir DNS daļiņu izolēšana no krēpām, asinīm, cerebrospinālajiem šķidrumiem, izkārnījumiem utt. par to turpmāko biosintēzi.

Ar kompleksa molekulārā ģenētiskā pētījuma palīdzību tiek noteikts mikroorganismu raksturojums pacienta ķermenī.

Šāda tuberkulozes analīze tiek veikta vairākos posmos:

• Pirmkārt, ņem bioloģiskos paraugus. Materiāli tiek ievietoti īpašos konteineros un nosūtīti uz laboratoriju.
• Pētniecības centrā analīzes tiek sasildītas līdz 97 grādiem. Tas ļauj iznīcināt mikroorganismu DNS genoma struktūru, kas sastāv no vairākām ķēdēm.
• Temperatūra ir īpaši pazemināta tā, ka primeri (DNS dalībnieki, no kuriem sākas biosintēzes process) var savienoties ar jebkuru dezoksiribonukleīnskābes ķēdi.
• Pēc tam tiek veikta detektēšanai nepieciešamo molekulu biosintēze.

Pēc 25–30 atkārtotiem cikliem laboratorijas izpētes procesā, ārstiem ir iespēja atpazīt, vai inficējošie mikroorganismi atrodas pacienta organismā vai nē.

Priekšrocības un trūkumi

PCR tuberkulozei ir vismodernākā diagnostikas metode. Šī metode ļauj noteikt infekciju jebkurā stadijā ar augstu uzticamību. Ieguvumi:

• Ātrums - pētījums ilgst ne vairāk kā piecas stundas. Tuberkulozes mikrobu testa rezultātus var atrast 24 stundu laikā.
• Drošības - PCR metodei nav vecuma kontrindikāciju.
• Savlaicīgums - šī metode ļauj jums noteikt tuberkulozi tajos posmos, kad slimībai nav simptomu.
• Augsta precizitātes pakāpe - ja analīzēs ir tikai daži mikroorganismi, tos var atrast, izmantojot polimerāzes ķēdes reakciju. Arī šī metode ļauj viegli identificēt tuberkulozes izraisītāju.
• Daudzpusība - diagnostika tiek izmantota ne tikai patēriņa noteikšanai, bet arī citām slimībām, piemēram, hlamīdijām, gonorejai uc

Neskatoties uz daudzajām priekšrocībām, šīs metodes izmantošana vietējā medicīnas praksē ir izņēmums, nevis noteikums. Tam ir vairāki iemesli.

Šīs metodes trūkumi ir šādi:

• Aptaujas augstās izmaksas.
• Metode nav piemērota tiem, kam veikta terapija, jo mirušo Koch baktēriju klātbūtne var novest pie viltus pozitīva rezultāta.
• Infekcijas mikroorganismu mutācijas gadījumā to genomu nevar atpazīt, izdarot nepatiesu secinājumu.
• Ir svarīgi izvēlēties pareizo noteikšanas vidi. Piemēram, tuberkulozes PCR (asinsrites ievadīšana) asins analīzes rezultāts būs negatīvs, ja nervu sistēma ir inficēta.
• Ne vienmēr ir iespējams piemērot šo metodi pacientiem, kuriem diagnosticēta plaušu bojājumi.

Turklāt šādai tuberkulozes analīzei ir nepieciešamas mūsdienīgas iekārtas, kurām 90% slimnīcu nav. NVS valstīs šādu analīzi var veikt Invitro klīniku tīkls.

Analīzes noteikumi

Ieteikumi pacientiem, kam tiek veikts šāds tuberkulozes tests, ir atkarīgi no analīzes veida.

Veicot asins PCR, ir jāatturas no smēķēšanas stundas pirms procedūras, divas stundas - lai izslēgtu alkoholu un taukus saturošus pārtikas produktus.

Ieteicams arī atturēties no fiziskas slodzes, nav iespējams veikt asinis tuberkulozei tukšā dūšā.

Lietojot tamponu no mutes un deguna dobuma, jūs nevarat ēst 2-4 stundas pirms procedūras, pretējā gadījumā tas nebūs informatīvs. Tāpat nedzeriet alkoholu.

Precīzai lasīšanai analīze ir aizliegta smēķēt agrāk kā stundu pirms procedūras. Priekšvakarā atturieties no zobu tīrīšanas un aerosolu un mutes aerosolu lietošanas.

Ja jums ir aizdomas par urogenitālās sistēmas tuberkulozi, pacientam 2-3 dienas pirms piegādes jāizslēdz sekss, 2-3 stundas pirms procedūras neiet uz tualeti „nelielā veidā”. Dzimumorgānus mazgā ar tīru ūdeni bez īpašiem līdzekļiem.

Sievietēm ieteicams neizmantot maksts tabletes, sveces, bumbas un arī atturēties no testēšanas kritiskās dienās.

5 dienas pirms piegādes, rezultāts ir nepieciešams, lai atteiktos no kolposkopijas procedūras, kā arī transvaginālo ultraskaņu,

Kad tiek izmantota PCR diagnostika?

Ne katrai klīnikai ir tik sarežģīta diagnoze, bet ārsti arvien biežāk izmanto šādas pētniecības metodes. Parasti šāda veida analīze tiek veikta īpašās situācijās.

• Ja rodas šaubīgi manta rezultāti, var izmantot tuberkulozes asins analīzi.
• Gadījumos, kad pacients saskaras ar inficētu personu, bet ārstējošais ārsts nevar precīzi noteikt diagnozi.
• Ārkārtas ķirurģijas gadījumā, kad nepieciešams īsā laikā noskaidrot, vai pacientam ir šī infekcija.
• Ja pacients ir stāvoklī, kad citas pētījuma metodes nav pietiekami drošas jaundzimušajam bērnam.

Jāatzīmē, ka šī diagnoze bērniem ieteicama drošības dēļ.

Ja studentam ir kontrindikācijas pret tuberkulīna testu, viņš var veikt asins analīzi tuberkulozei, nevis PCR.

PCR analīze tuberkulozei

PCR analīze tuberkulozei ir vispopulārākā medicīnisko pētījumu jomā šīs slimības jomā.

Bet kā brīdināt sevi un savus tuviniekus no šīs briesmīgās slimības? Kā nokārtot nepieciešamos PCR testus?

Tuberkulozes simptomi un to profilakse

Eksperti saka, ka apmēram 30% no kopējā iedzīvotāju skaita cieš no tuberkulozes.

Vislielākais slimības īpatsvars ir attīstījies neattīstītās valstīs. Tas visbiežāk rodas, samazinot imunitāti cilvēkiem.

Slimība ir viena no vecākajām. Šī slimība ir atrodama smadzeņu oderējumā, gremošanas traktā, locītavās un mugurkaulā, urīnceļu sistēmā un mazās vietās uz cilvēka ādas.

Eksperti visvieglāk nosaka skarto ādu. Vietnē ir nelielas plombas, kas laika gaitā palielinās, pārplūstot ar baltu šķidrumu.

Tuberkulozes izraisītāju visbiežāk var sajust, runājot ar slimu personu, kad viņi klepus vai šķaudīt. Parasti slimība turpinās bez simptomiem vai ir atvērta, bet tuberkulozes PCR diagnoze ļauj to atklāt agrīnā stadijā un ārkārtas gadījumos.

Slimības simptomi: ilgstošs mitrs klepus, drudzis, drebuļi, pārmērīga svīšana naktī, strauja ķermeņa masas samazināšanās, noguruma sajūta un vājums.

Visbīstamākā ir slimības atklātā forma. Persona, kas cieš no tuberkulozes, spēj inficēt veselus cilvēkus.

Svarīgākais plaušu slimības simptoms ir hemoptīze. Tas notiek jebkurā slimības formā.

Dažās situācijās tas var izraisīt asiņošanu no cilvēka plaušām. Tas ir ļoti bīstams un prasa steidzamu medicīnisku iejaukšanos.

Tuberkulozes profilaksei un atzīšanai eksperti nosaka: paraugu - tuberkulīna testu, bioloģiskā materiāla pārbaudi, fluorogrāfiju, rentgenstaru un asins analīzi, krēpu vai siekalu.

Slimības diagnostika

Labāka slimības diagnostika - tā ir pareiza un ārstēšanas sākumā. Vairumā gadījumu parastās patogēnu noteikšanas metodes ne vienmēr ir efektīvas un jau ir novecojušas.

Svarīgākais veids, kā noteikt un diagnosticēt plaušu slimību, ir medicīniskās pārbaudes testi. Parasti izmantojiet PCR diagnostiku. Šo aptauju nesen atklāja amerikāņu bioķīmiķis Mullis 1983. gadā.

Testu pacientam ar plaušu tuberkulozi veic tikai īpašos gadījumos, kad ir grūti noteikt diagnozi vai nav iespējams noteikt slimību instrumentālā veidā.

Polimerāzes ķēdes reakcija ir uzticama PCR metode. Šī analīze ļauj noteikt to, cik lielā mērā tas ir asins, urīna un muguras smadzeņu šķidrumos. Šāda medicīniskā pārbaude ir drošākā.

PCR analīze dod 100% rezultātu.

Tam ir augsta jutība, kas palīdz atpazīt slimību pirmo reizi pēc infekcijas, pirms parādās slimības simptomi. Šī analīzes metode dod rezultātu dažu stundu laikā pēc bioloģiskā materiāla piegādes. Šīs analīzes sēšana tiek veikta trīs reizes, bet slimības kuņģa aspirācija tiek veikta tikai slimnīcā.

Tika izstrādāti trīs kritēriji rezultātu noteikšanai: augsta precizitāte, jutīgums līdz 90%, specifiskums.

Dažos gadījumos tiek izmantots PCR tests:

1. diagnosticēt plaušu tuberkulozi;
2. noteikt slimības avotu;
3. ekstrapulmonālās lokalizācijas definīcija;
4. atkārtošanās diagnoze.

Novērtējiet rezultātu un norādiet pareizu ārstēšanu, var tikai speciālists. Ir ļoti svarīgi noteikt pareizu medicīniskās ārstēšanas shēmu, lai atklātu tuberkulozi, ir nepieciešams veikt testu par patogēna jutību pret pret tuberkulozes ierīcēm.

Dažādas tuberkulozes medicīniskās pārbaudes

Jūs varat veikt nepieciešamo analīzi divos veidos: ņemt no cilvēka asinis vai siekalās vai veikt krēpu.

Asins analīzes ar PCR var būt divu veidu: ELISA un PCR. Šāds pētījums palīdz uzraudzīt ārstēšanas efektivitāti.

ELISA palīdz atrast antivielas cilvēka organismā, kas ir pret tuberkulozes mikrobiem. Šis pētījums tiek veikts reizi dienā. Galvenais trūkums ir tā zemā jutība, kas ļauj noteikt tikai slimību ar zemu infekcijas līmeni.

Vispopulārākais un efektīvākais pētījums ir mycobacterium tuberculosis analīze. Ar viņu ārsti var viegli atrast baktēriju DNS cilvēka asinīs. Šo metodi izmanto arī, lai noteiktu baktēriju skaitu, kontrolētu pacienta ārstēšanu, lai noteiktu agrīnu atkārtošanos.

PCR siekalas ir viena no vismodernākajām pētniecības metodēm. Šāda analīze palīdzēs noteikt infekciozās baktērijas siekalās. PCR izmantošana palielina kaitīgo mikrobu DNS fragmentu skaitu.

Kultūras metode ir paredzēta cilvēka krēpu pārbaudei, lai atklātu mikrobaktērijas.

Sagatavošanās PCR testēšanai

Uzmanību, jums ir nepieciešama pareiza siekalu sagatavošana PCR. Ja netiek ievērotas visas receptes, analīze var būt kļūdaina.

Pirms testa veikšanas ir aizliegts smēķēt, lietot pārtiku un medikamentus, kā arī patērēt alkoholu 12 stundas. Ir aizliegts tīrīt zobus, jūs nevarat izmantot skalošanas līdzekli, mutes atsvaidzinātāju un zobu diegs.

Aizliegts lietot lūpu krāsu un ieiet intīmās attiecībās. Atļauts izskalot muti ar tīru ūdeni;

Šī pārbaude palīdzēs noteikt: herpes, hlamīdijas, tuberkulozi, pneimonijas patogēnus, onkovirus, barolleozi, mononukleozi, HIV, visu veidu hepatītu, masaliņas.

Mikobaktēriju analīze tiek veikta galvenokārt pretrunīgos gadījumos, proti, ja ir grūti diagnosticēt diagnozi, vai pirms operācijas uzsākšanas ir bijis kontakts ar pacientu ar tuberkulozi, lai noteiktu slimību. Lieto grūtnieces pārbaudei, jo šī metode ir drošākā mātei un auglim.

Dažreiz analīze tiek veikta privātā klīnikā, jo pacients neievēroja testēšanas noteikumus, bet vienlaikus uztraucas par visiem simptomiem. Analīzi var veikt, ja pēc Mantoux testa veikšanas speciālisti nav pārliecināti vai pacients ir bērns.

Medicīnisko testu priekšrocības un trūkumi tuberkulozes noteikšanai

PCR ir populārākais un efektīvākais veids, kā noteikt slimību.

Lielākā atšķirība no citiem pētījumiem ir ātrs un precīzs rezultāts.

Šīs medicīniskās pārbaudes priekšrocība ir tā, ka to var veikt uroloģiskiem, ginekoloģiskiem, onkoloģiskiem, infekcioziem, hematoloģiskiem, plaušu, gastroenteroloģiskiem un citiem pētījumiem.

Šādas medicīniskās izpētes galvenā priekšrocība ir tāda, ka asins analīzes, krēpas un siekalas ir gatavas īsā laikā (slimības atklāšanai būs nepieciešamas 5 stundas). Šāda medicīniskā pārbaude ļauj veikt pārbaudes, ja noteiktas slimības izpētes metodes ir aizliegtas vai nav pieejamas. Liels, lai atklātu atkārtošanos cilvēkiem.

Pateicoties šai analīzei, bija iespējams veikt pētījumus par jebkuru bioloģisko vidi. Ir atļauts ņemt materiālus no bērniem. PCR ļauj identificēt slimību izraisošo līdzekli jebkurā slimības stadijā. Augstas jutības dēļ mikrobi var atrast pat tad, ja ir tikai dažas baktērijas.

PCR metode paplašina tās iespējas. To izmanto arī paternitātes noteikšanai, jaunu gēnu, mutāciju, DNS elementu šķērsošanai utt.

Šī pētījuma trūkumi ir dārga apsekojuma metode.

Pēc ārstēšanas asins analīzes var liecināt par dzīvu vai mirušu patogēnu klātbūtni nelielos daudzumos, pēc medicīniskās pārbaudes, tas dos pozitīvu rezultātu.

Baktērijas un mikrobi var izmainīties, pēc tam PCR nevarēs tos identificēt un identificēt, tāpēc tikai speciālists var noteikt nepieciešamo vidi, citādi šāda medicīniskā pārbaude būs neefektīva.

Pēc testēšanas ir negatīvs rezultāts, bet tas neizslēdz iespēju, ka persona ir inficēta ar tuberkulozi. Šāda medicīniskā pārbaude tiek veikta pacientiem ar smagu plaušu slimību, ja citi pētījumi nedod precīzus rezultātus. PCR būs noderīga cilvēkiem ar plaušu un ekstrapulmonālo tuberkulozi.

Diemžēl medicīnas iekārtas tuberkulozes patogēnu noteikšanai ir ļoti dārgas.

Publiskās slimnīcas un klīnikas to nevar atļauties, bet apmaksātas klīnikas veic pacientu pārbaudes un īsā laikā nodrošina gatavus rezultātus.

Tuberkulozes PCR diagnoze

Tuberkuloze ir īpaša infekcija, tās koncentrācija var būt cilvēka audos gadiem ilgi un pēc tam izplatīties vairākus mēnešus. Tā ir hroniska slimība, kuras optimālo ārstēšanas režīmu ir grūti izvēlēties. Viens no iemesliem ir novēlota diagnoze, kad mikobaktērijas, kamēr tās atrodas cilvēka organismā, jau ir pielāgojušās daudzām zālēm.

Kādas ir modernās diagnostikas metodes? PCR diagnostika - kas tas ir? Kā šis pētījums tiek veikts? Kādos gadījumos šī metode diagnosticē tuberkulozi un kāda ir tās būtība?

Kas ir PCR diagnostika

Tā ir viena no modernākajām metodēm ne tikai slimību diagnosticēšanai, bet arī bioloģiskā materiāla atklāšanai. PCR diagnostika tika izgudrota salīdzinoši nesen. Apmēram 30 gadus atpakaļ 1983. gadā amerikāņu bioķīmiķis Carey Banks Mullis ierosināja kompleksu atjaunošanas shēmu mikroorganismu bioloģiskajam materiālam vienā īsajā segmentā. Pateicoties savam atklājumam, zinātniekam tika piešķirta augstākā balva - Nobela prēmija.

Kas tas ir - infekciju PCR diagnoze? Polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) ir vīrusu slimību noteikšanas diagnoze, kuras pamatā ir gēnu inženierijas metodes. To plaši izmanto medicīnas mikrobioloģijā, imunoloģijā un viroloģijā. Metode ir universāla un palīdz veikt diagnozi ar nelielu daudzumu materiāla. Infekciju var noteikt burtiski pirmajās inficēšanās stundās, ilgi pirms pirmo slimības simptomu parādīšanās.

Šī metode sastāv no slimības ieguvēja no materiāla, nevis paša patogēna, bet genoma fragmenti (DNS daļiņas), tās biosintēze ar turpmāko noteikšanu, kura mikroorganismu klase iegūst ģenētisko materiālu, izmantojot molekulārās ģenētiskās metodes.

Neskatoties uz to, ka tas ir sarežģīts process, tas aizņem daudz mazāk laika nekā daudzi bioloģiskās metodes infekcijas izraisītāju atklāšanai. Tikai dažu stundu laikā ar PCR var noteikt mikroorganismu. Lai to izdarītu, nav nepieciešams to izolēt no vides (asins, cerebrospinālā šķidruma, krēpu) un ilgu laiku audzēt uz mākslīgajiem barības vielām. Pietiek ar to, ka pētāmā materiālā ir neliels infekcijas ierosinātāja DNS virknes fragments.

Reakcijas pamatā ir iespēja mākslīgos apstākļos (in vitro) radīt infekcijas ierosinātāja nukleīnskābes molekulu sintēzi.

Kas ir nepieciešams PCR?

1. Gruntējumi ir DNS segmenti, no kuriem sākas biosintēze vai radīšana.
2. Nukleotīdi vai kompleksie savienojumi, kas ir DNS vai RNS molekulas pamatā.
3. Polimerāzes ķēdes reakcija nav iespējama bez polimerāzes klātbūtnes, kas ir enzīms, kas paātrina PCR.

PCR diagnostikas posmi

Kā molekulārā diagnostika tiek veikta ar PCR? Procedūra ir vienkārša un aizņem īsu laiku, ņemot vērā materiālu vākšanu.

1. Pirms pētījuma uzsākšanas viņi veic nepieciešamo bioloģisko materiālu - tas ir bronhu mazgāšanas ūdens, asinis, kuņģa saturs, krēpas. Bioloģiskā materiāla veids ir atkarīgs no iespējamā patogēna.
2. DNS primārās struktūras denaturācija vai iznīcināšana, kas sastāv no divām ķēdēm. Šī posma būtība ir atdalīt abas ķēdes augstas temperatūras ietekmē (maksimums ir 98 ° C, kas ilgst ne vairāk kā divas minūtes).
3. Nākamajā PCR stadijā, ko sauc par anulēšanu, temperatūra tiek samazināta par vairākiem grādiem, lai grunts piesaistītos DNS virknei.
4. Paildzināšanās, kuras laikā notiek tieši vēlamo molekulu sintēze.

Tā rezultātā tikai 25–30 šādi cikli saņem nepieciešamo mikroorganismu DNS kopiju skaitu, kas ir viegli atpazīstami.

Vai PCR ir nepieciešama tuberkulozes diagnoze?

Nav iespējams absolūti visiem cilvēkiem, kuriem ir aizdomas par tuberkulozi, veikt PCR, jo metode prasa dārgas iekārtas. Ne visas publiskās klīnikas var atļauties to iegādāties. Turklāt notika, ka parasti infekcijas diagnostikas metodes vairumā gadījumu arī pamato sevi.

Tie ietver:

• pacientu aptauja, vēsture;
• pilnīga personas pārbaude;
• pētījums, izmantojot Mantoux tuberkulīna testu;
• rentgenogrāfija vai fluorogrāfija;
• datorsistēmas diagnostika, ja nepieciešams;
• mikrobioloģiskās izpētes metodes: uztriepes mikroskopija un krēpu bakterioloģiskā pārbaude.

PCR tuberkulozei veic īpašos gadījumos, kad ir grūti veikt diagnozi vai nav iespējams veikt citas instrumentālas metodes.

Neskatoties uz diagnostikas metožu pārpilnību, tuberkulozes biežums turpina pieaugt. Pašlaik nav tikai izaugsmes, bet arī citas iezīmes:

• slimība bieži notiek smagā formā;
• pieaug nāvējošu gadījumu skaits;
• arvien izturīgākas pret mūsdienu ķīmijterapiju ir diagnosticētas slimības formas.

Pašu cilvēku nevēlēšanās katru gadu veikt ikdienas medicīniskās pārbaudes, vakcinācijas noraidīšana noved pie tuberkulozes izplatīšanās. Šādos apstākļos mums ir nepieciešamas ātras, informatīvas un efektīvas pētniecības metodes, kas būtu pieejamas bērniem un pieaugušajiem. Visas iepriekš minētās diagnostikas metodes ir daudz zemākas par PCR.

Ieguvumi no tuberkulozes diagnosticēšanas ar PCR

Šis pētījums, kaut arī tas ir jauns, ir pierādījis sevi labi, jo īpaši strīdīgos gadījumos, kad nav iespējams veikt diagnozi vairāku iemeslu dēļ.

Pateicoties PCR, ir daudz vieglāk noteikt tuberkulozes izraisītāju testa materiālā.

PCR diagnostikas priekšrocības ir šādas.

1. Tā ir ātra analīze. Nelielu DNS molekulas fragmentu var izmantot, lai diagnosticētu tikai dažas stundas (aptuveni piecas), ko veiksmīgi izmanto ārkārtas situācijās, kad, piemēram, pirms operācijas ir nepieciešams noteikt, vai persona ir slima ar tuberkulozi.
2. PCR analīze ir pieļaujama gadījumā, ja citas metodes nav pieejamas vai aizliegtas (plaušu tuberkulozes noteikšanai, dažkārt jums ir jāveic vairāki radiogrāfiskie attēli, kas būs liela radiācijas deva).
3. Ar PCR palīdzību tiek pārbaudīta jebkura bioloģiskā vide, lai tajā atrastu patogēnu. Piemēram, ja ir aizdomas par tuberkulozo meningītu, varat veikt smadzeņu šķidruma izpēti.
4. Bērnu infekcijas slimību atļautā PCR diagnoze, jo metode ir droša.
5. Ļauj identificēt patogēnu jebkurā slimības stadijā.
6. PCR augsta jutība ļauj noteikt Mycobacterium tuberculosis, pat ja bioloģiskajā materiālā ir tikai daži mikroorganismi.
7. Ir labi veikt slimības atkārtošanās diagnozi.

Galu galā nolasītais PCR šķiet gandrīz perfekta diagnostikas metode, kas ikvienam liek domāt par tuberkulozi. Bet šeit ir arī trūkumi, tie ir jāņem vērā.

PCR trūkumi tuberkulozes diagnostikā

Mūsu laikā šāda diagnostika ir retāka nekā regularitāte. Un tam ir iemesls.

1. Tā ir dārga pētniecības metode. Daudzās klīnikās PCR aprīkojums nav pieejams augsto izmaksu dēļ, bet analīzi joprojām var veikt maksas laboratorijās.
2. Tūlīt pēc ārstēšanas cilvēka ķermenī joprojām var būt miruši mikobaktērijas vai dzīvo nelielos daudzumos (rezultāts būs pozitīvs PCR diagnostikas laikā), tāpēc šī metode būs neuzticama, nav lietderīgi to veikt.
3. Mikobaktēriju mutācijas izraisa neefektīvu PCR - nav iespējams sintezēt normālu DNS virkni.
4. Ir nepieciešams izvēlēties pareizo vidi pētījumam, asinis tiek ņemtas tikai tad, ja ir aizdomas par inficēšanos (sepsi), nav nepieciešams veikt krēpu, ja rodas jautājums par nervu sistēmas orgānu tuberkulozi. Šajā gadījumā PCR nespēs noteikt patogēnu un diagnoze nebūs informatīva.

Indikācijas tuberkulozes noteikšanai, izmantojot PCR analīzi

Tuberkulozes PCR diagnoze tiek veikta visbiežāk pretrunīgos gadījumos. Kad ārsti nosūta šo pētījumu?

1. Ja ir grūti noteikt diagnozi, izmantojot parastās pieejamās metodes, bet bija saskare ar pacientu ar tuberkulozi.
2. Gadījumā, ja persona nevar tikt piegādāta klīnikā, lai veiktu ikdienas rutīnas tuberkulozes testus, ir vieglāk viņu pārbaudīt, izmantojot PCR, jo testa krēpu var piegādāt burkā un diagnozi apstiprina dažu stundu laikā.
3. Ja personai ir nepieciešama operācija ārkārtas situācijā, un ir steidzami jāpārbauda, ​​vai viņš ir slims ar tuberkulozi.
4. Ja nepieciešams, grūtniecei ir arī labāk pārbaudīt tuberkulozi, izmantojot PCR, jo metode ir droša.
5. Pamatojoties uz to, ikviens, kam nav diagnosticēta tuberkuloze, ir apstiprināta, izmantojot bakterioloģiskās metodes un fluoroskopiju. Tas notiek tad, ja plaušu bojājums tiešā attēlā nav pamanāms, un persona, kas veic krēpu piegādi pētījumam, nevarēja ievērot ieteikumus par pareizu materiālu savākšanu. Šajā gadījumā persona uztrauc visus simptomus, kas raksturīgi plaušu tuberkulozei.
6. Ja rodas šaubas par Mantoux testa rezultātiem.
7. Bērniem vēlams veikt PCR diagnozi attiecībā uz tuberkulozi. Procedūra ir droša, nerada papildu radiācijas iedarbību un ir efektīva, lai atklātu grūti diagnosticējamas slimības formas.

Savlaicīga tuberkulozes diagnoze ir atslēga, lai pareizi izrakstītu ārstēšanu un mazinātu slimības izplatīšanos. Bieži vien pazīstamās slimību atklāšanas metodes ne vienmēr ir efektīvas. Tāpēc PCR šodien ir viens no drošākajiem un drošākajiem veidiem, kā noteikt infekcijas attīstības sākumposmā.