Kā veikt analīzi ar PCR: procedūras apraksts

Faringīts

Polimerāzes ķēdes reakcija ir zināma jau 30 gadus. To plaši izmanto daudzās jomās, sākot no arheoloģijas līdz ģenētikai.

Tā ir PCR metode, kas palīdz noteikt paternitāti, bet visbiežāk to izmanto, lai identificētu dažādas infekcijas slimības cilvēka organismā.

Kā tiek veikta PCR analīze un kas tas ir? Mēs centīsimies sīkāk atbildēt uz šiem jautājumiem.

PCR analīze - kas tas ir?

Polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) ir augstas precizitātes molekulārās ģenētiskās diagnozes metode, kas ļauj atklāt dažādas infekcijas un iedzimtas slimības gan akūtās, gan hroniskajās stadijās, un ilgi pirms slimība var izpausties.

PCR metode ir absolūti specifiska un veikta pareizi, tā nevar dot viltus pozitīvu rezultātu. Tas ir, ja nav infekcijas, analīze nekad neparādīs, kas tas ir. Tāpēc diagnozes apstiprināšanai tagad ir ļoti bieži veikta papildu PCR analīze, lai noteiktu izraisītāju un tā raksturu.

Polimēru ķēdes reakcija (PCR) 1983. gadā, ko izstrādāja Carey Mulllis (ASV), kurai 1993. gadā tika piešķirta Nobela prēmija ķīmijā.

Kāda ir šīs metodes priekšrocība?

Ar šo metodi diagnosticējot var atrast patogēnu tieši gēnā, kas atrodas pētāmos materiālos. Tā ir visprecīzākā dzimumorgānu infekciju, slēptās infekcijas, dažādu seksuāli transmisīvo slimību analīze.

Atšķirības PCR diagnostikā no citām laboratorijas pētījumu metodēm ir šādas:

  • metodes mērķis ir identificēt pašu patogēnu;
  • PCR diagnoze ir universāla: vairāku patogēnu noteikšanai;
  • slimībām, pietiek ar tikai vienu pacienta bioloģisko paraugu;
  • metode ir ļoti jūtīga un nav saistīta ar citām krusteniskām reakcijām.

Turklāt PCR diagnostikas priekšrocība ir tā, ka jebkurš pacienta bioloģiskais materiāls ir piemērots analīzei: asinis, izdalīšanās no dzimumorgāniem, urīns, sperma.

Kādas infekcijas var atklāt uz PCR?

Ķermenī var būt liels skaits patogēnu, tostarp „slēptās”, kas ilgu laiku neizpaužas.

PCR uztriepes analīze ļauj atklāt šādas infekcijas:

Pētījuma materiāls PCR parasti ir krēpās, siekalās, urīnā un asinīs. Pirms analīzes jums ir rūpīgi jāgatavojas, saņemot iepriekšēju konsultāciju ar ārstu.

Asinis PCR parasti tiek ievadītas tukšā dūšā. Labi rezultāti parāda analīzi, kad pētījuma materiāls ir ņemts no dzemdes kakla kanāla vai urīnizvadkanāla. Šajā gadījumā vislabāk ir veikt PCR diagnostiku ne vēlāk kā vienu dienu pēc dzimumakta.

PCR šķirnes

PCR izmanto daudzās jomās analīzei un zinātniskiem eksperimentiem. Ir dažādas analīzes metodes:

  1. Reversie transkripcijas PCR (Reverse Transcription PCR, RT-PCR (angļu valoda)) tiek izmantota, lai pastiprinātu, izolētu vai identificētu zināmu secību no RNS bibliotēkas.
  2. Apgriezto PCR (invertu PCR (Eng.)) - izmanto, ja vēlamajā secībā ir zināma tikai neliela daļa. Šī metode ir īpaši noderīga, ja ir nepieciešams noteikt blakus esošās sekvences pēc DNS ievietošanas genomā.
  3. Lai samazinātu reakcijas blakusproduktu skaitu, tiek izmantots ligzdots PCR (ligzdots PCR). Tiek izmantoti divi primeru pāri, un tiek veiktas divas secīgas reakcijas.
  4. Asimetriska PCR (asimetriskā PCR) tiek veikta, ja ir nepieciešams pastiprināt galvenokārt vienu no sākotnējās DNS ķēdēm. Izmanto dažos secības un hibridizācijas testos.
  5. Kvantitatīvais PCR (kvantitatīvais PCR, Q-PCR (Eng.)) Vai reālā laika PCR izmanto, lai tieši pārraudzītu konkrēta PCR produkta daudzuma mērījumus katrā reakcijas ciklā.
  6. PCR solis (Touchdown PCR (Eng.)) - izmantojot šo pieeju, samazina nespecifiskas primeru saistīšanās ietekmi.
  7. Grupu specifiskā PCR (grupas specifiskā PCR) - PCR saistītām sekvencēm vienā vai starp dažādām sugām, izmantojot šo secību konservatīvus primerus.

Ja matricas nukleotīdu secība ir daļēji vai nav zināma, ir iespējams izmantot degenerētus praimerus, kuru secība satur deģenerētas pozīcijas, kurās var atrasties jebkura bāze. Piemēram, primer sekvence var būt:... ATH..., kur H ir A, T vai C.

Kādi bioloģiskie materiāli tiek pētīti?

Materiāls PCR pētījumiem, kurā var konstatēt svešu baktēriju DNS vai vīrusa DNS vai RNS, var sastāvēt no dažādiem bioloģiskiem medijiem un cilvēku šķidrumiem:

  1. Urīns. To var izmantot urogenitālā trakta inficēšanai vīriešiem un urīna orgāniem sievietēm (vīriešiem urīna izmantošana kā materiāls aizstāj epitēlija skrāpēšanu).
  2. Flegma. To lieto, lai diagnosticētu tuberkulozi un retāk diagnosticētu hlamīdiju un mikoplazmozes elpošanas formas. Krēpju daudzums 15-20 ml tiek savākts sterilā (vienreizējās lietošanas) pudelē.
  3. Bioloģiskie šķidrumi. Prostatas sula, pleiras, galvas smadzeņu, amnija, locītavu šķidrums, bronhu alvejas skalošana, siekalas tiek ņemtas atbilstoši indikācijām.
  4. Epitēlija skrāpējumi no gļotādām. Bieži izmanto seksuāli transmisīvo slimību (STS) diagnosticēšanai, piemēram, gonoreju, hlamīdijas, mikoplazmozi, ureaplasmozi, trichomonozi, gardnerellezis, herpes un citas infekcijas, kas ietekmē gļotādas.
  5. Biopsijas. Visbiežāk izmantotās kuņģa un divpadsmitpirkstu zarnas biopsijas, lai identificētu Helicobacter pylori infekciju.
  6. Asinis, plazma, serums. Izmanto hepatīta B, C, D, G vīrusu, herpes, CMV, HIV, cilvēka gēnu PCR analīzei.

Kā sagatavoties analīzei?

PCR rezultāta uzticamība ir tieši atkarīga no materiāla piegādes pārbaudei pareizības. Materiāls nedrīkst būt piesārņots, pretējā gadījumā pētījuma rezultāts nebūs objektīvs. Svarīgākie ieteikumi pirms PCR analīzes iesniegšanas ir šādas prasības:

  1. Urīns tiek piegādāts no rīta sterilā traukā.
  2. No rīta tukšā dūšā jāveic asins analīzes infekcijai.
  3. Seksuālo aktivitāti nav nepieciešams rādīt dienu pirms analīzes.

Analīzes rezultāts būs gatavs 1,5-2 dienas pēc procedūras. Ir tādas situācijas, kad rezultātu var sagatavot tajā pašā dienā.

CRP analīzes dekodēšana

Prezentētā pētījuma interpretācijas process atšķiras ar tās vienkāršību. PCR analīzes rezultātus var iegūt 1,5-2x dienas pēc materiāla piegādes. Dažos gadījumos rezultāts ir gatavs jau pirmajā dienā, un tas ir tas, ko tie var nozīmēt:

  • Negatīvs rezultāts norāda, ka diagnosticētajā materiālā trūkst infekcijas izraisītāja.
  • Pcr pozitīvs nozīmē, ka cilvēka organismā ir patogēna DNS vai RNS.

Dažos gadījumos iegūst kvantitatīvu mikroorganismu noteikšanu. Tas īpaši attiecas uz oportūnistisko mikroorganismu izraisītajām slimībām. Tā kā šīm baktērijām ir negatīva ietekme tikai ar pārmērīgu daudzumu.

Arī PCR kvantitatīvā analīze ir svarīga terapeitiskās taktikas izvēlei un vīrusu infekciju, piemēram, HIV un hepatīta vīrusu ārstēšanai.

Cik precīza ir infekciju PCR diagnoze?

PCR metodi raksturo augsta precizitāte, specifiskums un jutīgums. Tas nozīmē, ka šī analīze spēj:

  • precīzi noteikt infekcijas esamību vai neesamību;
  • precīzi norādiet, kāda veida infekcija (specifika);
  • atklāt infekciju pat ar ļoti zemu mikroorganismu DNS saturu bioloģiskajā materiālā, t
  • kas ir pakļauts pētījumiem (jutīgums).

PCR analīze: cena un laiks

Konkrētas analīzes cena būs atkarīga no tā, kādu infekciju esat pārbaudījis. Aptuvenās cenas un noteikumi:

  1. STI: 300-500 rubļu, laiks - 1 diena;
  2. Epšteina-Barra vīruss, cilvēka papilomas vīruss, herpes vīruss, citomegalovīruss: 300-500 rubļi, termini - 1 diena;
  3. A, B, C, D, G hepatīts: 650 rubļu kvalitatīva analīze, 2000 rubļu kvantitatīvā analīze. Noteikumi - līdz 5 dienām;
  4. Antivielas pret C hepatīta vīrusu kopumā (Anti-HCV) - 420 rubļi;
  5. Antivielas pret C hepatīta vīrusu, IgM (Anti-HCV IgM) - 420 rubļi;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 rubļu, termiņi - 1 diena;
  7. HIV (antivielas un antigēni) - 380 rubļi;
  8. HIV RNS, kvalitatīvi - 3500 rubļu;
  9. HIV RNS, kvantitatīvi - 11 000 rubļu.

Lai ietaupītu naudu, varat izvēlēties fiksētu analīzes partiju. Šo pakalpojumu nodrošina lielākā daļa klīniku, kur iespējams veikt analīzi ar ERP metodi (invitro, onclinics uc).

Tuberkulozes PCR diagnoze

Tuberkuloze ir īpaša infekcija, tās koncentrācija var būt cilvēka audos gadiem ilgi un pēc tam izplatīties vairākus mēnešus. Tā ir hroniska slimība, kuras optimālo ārstēšanas režīmu ir grūti izvēlēties. Viens no iemesliem ir novēlota diagnoze, kad mikobaktērijas, kamēr tās atrodas cilvēka organismā, jau ir pielāgojušās daudzām zālēm.

Kādas ir modernās diagnostikas metodes? PCR diagnostika - kas tas ir? Kā šis pētījums tiek veikts? Kādos gadījumos šī metode diagnosticē tuberkulozi un kāda ir tās būtība?

Kas ir PCR diagnostika

Tā ir viena no modernākajām metodēm ne tikai slimību diagnosticēšanai, bet arī bioloģiskā materiāla atklāšanai. PCR diagnostika tika izgudrota salīdzinoši nesen. Apmēram 30 gadus atpakaļ 1983. gadā amerikāņu bioķīmiķis Carey Banks Mullis ierosināja kompleksu atjaunošanas shēmu mikroorganismu bioloģiskajam materiālam vienā īsajā segmentā. Pateicoties savam atklājumam, zinātniekam tika piešķirta augstākā balva - Nobela prēmija.

Kas tas ir - infekciju PCR diagnoze? Polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) ir vīrusu slimību noteikšanas diagnoze, kuras pamatā ir gēnu inženierijas metodes. To plaši izmanto medicīnas mikrobioloģijā, imunoloģijā un viroloģijā. Metode ir universāla un palīdz veikt diagnozi ar nelielu daudzumu materiāla. Infekciju var noteikt burtiski pirmajās inficēšanās stundās, ilgi pirms pirmo slimības simptomu parādīšanās.

Šī metode sastāv no slimības ieguvēja no materiāla, nevis paša patogēna, bet genoma fragmenti (DNS daļiņas), tās biosintēze ar turpmāko noteikšanu, kura mikroorganismu klase iegūst ģenētisko materiālu, izmantojot molekulārās ģenētiskās metodes.

Neskatoties uz to, ka tas ir sarežģīts process, tas aizņem daudz mazāk laika nekā daudzi bioloģiskās metodes infekcijas izraisītāju atklāšanai. Tikai dažu stundu laikā ar PCR var noteikt mikroorganismu. Lai to izdarītu, nav nepieciešams to izolēt no vides (asins, cerebrospinālā šķidruma, krēpu) un ilgu laiku audzēt uz mākslīgajiem barības vielām. Pietiek ar to, ka pētāmā materiālā ir neliels infekcijas ierosinātāja DNS virknes fragments.

Reakcijas pamatā ir iespēja mākslīgos apstākļos (in vitro) radīt infekcijas ierosinātāja nukleīnskābes molekulu sintēzi.

Kas ir nepieciešams PCR?

  1. Gruntējumi ir DNS segmenti, no kuriem sākas biosintēze vai radīšana.
  2. Nukleotīdi vai kompleksie savienojumi, kas ir DNS vai RNS molekulas pamatā.
  3. Polimerāzes ķēdes reakcija nav iespējama bez polimerāzes klātbūtnes, kas ir enzīms, kas paātrina PCR.

PCR diagnostikas posmi

Kā molekulārā diagnostika tiek veikta ar PCR? Procedūra ir vienkārša un aizņem īsu laiku, ņemot vērā materiālu vākšanu.

  1. Pirms pētījuma uzsākšanas viņi veic nepieciešamo bioloģisko materiālu - tas ir bronhu mazgāšanas ūdens, asinis, kuņģa saturs, krēpas. Bioloģiskā materiāla veids ir atkarīgs no iespējamā patogēna.
  2. DNS primārās struktūras denaturācija vai iznīcināšana, kas sastāv no divām ķēdēm. Šī posma būtība ir atdalīt abas ķēdes augstas temperatūras ietekmē (maksimums ir 98 ° C, kas ilgst ne vairāk kā divas minūtes).
  3. Nākamajā PCR stadijā, ko sauc par anulēšanu, temperatūra tiek samazināta par vairākiem grādiem, lai grunts piesaistītos DNS virknei.
  4. Paildzināšanās, kuras laikā notiek tieši vēlamo molekulu sintēze.

Tā rezultātā tikai 25–30 šādi cikli saņem nepieciešamo mikroorganismu DNS kopiju skaitu, kas ir viegli atpazīstami.

Vai PCR ir nepieciešama tuberkulozes diagnoze?

Nav iespējams absolūti visiem cilvēkiem, kuriem ir aizdomas par tuberkulozi, veikt PCR, jo metode prasa dārgas iekārtas. Ne visas publiskās klīnikas var atļauties to iegādāties. Turklāt notika, ka parasti infekcijas diagnostikas metodes vairumā gadījumu arī pamato sevi.

Tie ietver:

  • pacientu aptauja, vēsture;
  • pilnīga personas pārbaude;
  • pētījums, izmantojot Mantoux tuberkulīna testu;
  • rentgenogrāfija vai fluorogrāfija;
  • datorsistēmas diagnostika, ja nepieciešams;
  • mikrobioloģiskās izpētes metodes: uztriepes mikroskopija un krēpu bakterioloģiskā pārbaude.

PCR tuberkulozei veic īpašos gadījumos, kad ir grūti veikt diagnozi vai nav iespējams veikt citas instrumentālas metodes.

Neskatoties uz diagnostikas metožu pārpilnību, tuberkulozes biežums turpina pieaugt. Pašlaik nav tikai izaugsmes, bet arī citas iezīmes:

  • slimība bieži notiek smagā formā;
  • pieaug nāvējošu gadījumu skaits;
  • arvien izturīgākas pret mūsdienu ķīmijterapiju ir diagnosticētas slimības formas.

Pašu cilvēku nevēlēšanās katru gadu veikt ikdienas medicīniskās pārbaudes, vakcinācijas noraidīšana noved pie tuberkulozes izplatīšanās. Šādos apstākļos mums ir nepieciešamas ātras, informatīvas un efektīvas pētniecības metodes, kas būtu pieejamas bērniem un pieaugušajiem. Visas iepriekš minētās diagnostikas metodes ir daudz zemākas par PCR.

Ieguvumi no tuberkulozes diagnosticēšanas ar PCR

Šis pētījums, kaut arī tas ir jauns, ir pierādījis sevi labi, jo īpaši strīdīgos gadījumos, kad nav iespējams veikt diagnozi vairāku iemeslu dēļ.

Pateicoties PCR, ir daudz vieglāk noteikt tuberkulozes izraisītāju testa materiālā.

PCR diagnostikas priekšrocības ir šādas.

  1. Tā ir ātra analīze. Nelielu DNS molekulas fragmentu var izmantot, lai diagnosticētu tikai dažas stundas (aptuveni piecas), ko veiksmīgi izmanto ārkārtas situācijās, kad, piemēram, pirms operācijas ir nepieciešams noteikt, vai persona ir slima ar tuberkulozi.
  2. PCR analīze ir pieļaujama gadījumā, ja citas metodes nav pieejamas vai aizliegtas (plaušu tuberkulozes noteikšanai, dažkārt jums ir jāveic vairāki radiogrāfiskie attēli, kas būs liela radiācijas deva).
  3. Ar PCR palīdzību tiek pārbaudīta jebkura bioloģiskā vide, lai tajā atrastu patogēnu. Piemēram, ja ir aizdomas par tuberkulozo meningītu, varat veikt smadzeņu šķidruma izpēti.
  4. Bērnu infekcijas slimību atļautā PCR diagnoze, jo metode ir droša.
  5. Ļauj identificēt patogēnu jebkurā slimības stadijā.
  6. PCR augsta jutība ļauj noteikt Mycobacterium tuberculosis, pat ja bioloģiskajā materiālā ir tikai daži mikroorganismi.
  7. Ir labi veikt slimības atkārtošanās diagnozi.

Galu galā nolasītais PCR šķiet gandrīz perfekta diagnostikas metode, kas ikvienam liek domāt par tuberkulozi. Bet šeit ir arī trūkumi, tie ir jāņem vērā.

PCR trūkumi tuberkulozes diagnostikā

Mūsu laikā šāda diagnostika ir retāka nekā regularitāte. Un tam ir iemesls.

  1. Tā ir dārga pētniecības metode. Daudzās klīnikās PCR aprīkojums nav pieejams augsto izmaksu dēļ, bet analīzi joprojām var veikt maksas laboratorijās.
  2. Tūlīt pēc ārstēšanas cilvēka ķermenī joprojām var būt miruši mikobaktērijas vai dzīvo nelielos daudzumos (rezultāts būs pozitīvs PCR diagnostikas laikā), tāpēc šī metode būs neuzticama, nav lietderīgi to veikt.
  3. Mikobaktēriju mutācijas izraisa neefektīvu PCR - nav iespējams sintezēt normālu DNS virkni.
  4. Ir nepieciešams izvēlēties pareizo vidi pētījumam, asinis tiek ņemtas tikai tad, ja ir aizdomas par inficēšanos (sepsi), nav nepieciešams veikt krēpu, ja rodas jautājums par nervu sistēmas orgānu tuberkulozi. Šajā gadījumā PCR nespēs noteikt patogēnu un diagnoze nebūs informatīva.

Indikācijas tuberkulozes noteikšanai, izmantojot PCR analīzi

Tuberkulozes PCR diagnoze tiek veikta visbiežāk pretrunīgos gadījumos. Kad ārsti nosūta šo pētījumu?

  1. Ja ir grūti noteikt diagnozi, izmantojot parastās pieejamās metodes, bet bija saskare ar pacientu ar tuberkulozi.
  2. Gadījumā, ja persona nevar tikt piegādāta klīnikā, lai veiktu ikdienas rutīnas tuberkulozes testus, ir vieglāk viņu pārbaudīt, izmantojot PCR, jo testa krēpu var piegādāt burkā un diagnozi apstiprina dažu stundu laikā.
  3. Ja personai ir nepieciešama operācija ārkārtas situācijā, un ir steidzami jāpārbauda, ​​vai viņš ir slims ar tuberkulozi.
  4. Ja nepieciešams, grūtniecei ir arī labāk pārbaudīt tuberkulozi, izmantojot PCR, jo metode ir droša.
  5. Pamatojoties uz to, ikviens, kam nav diagnosticēta tuberkuloze, ir apstiprināta, izmantojot bakterioloģiskās metodes un fluoroskopiju. Tas notiek tad, ja plaušu bojājums tiešā attēlā nav pamanāms, un persona, kas veic krēpu piegādi pētījumam, nevarēja ievērot ieteikumus par pareizu materiālu savākšanu. Šajā gadījumā persona uztrauc visus simptomus, kas raksturīgi plaušu tuberkulozei.
  6. Ja rodas šaubas par Mantoux testa rezultātiem.
  7. Bērniem vēlams veikt PCR diagnozi attiecībā uz tuberkulozi. Procedūra ir droša, nerada papildu radiācijas iedarbību un ir efektīva, lai atklātu grūti diagnosticējamas slimības formas.

Savlaicīga tuberkulozes diagnoze ir atslēga, lai pareizi izrakstītu ārstēšanu un mazinātu slimības izplatīšanos. Bieži vien pazīstamās slimību atklāšanas metodes ne vienmēr ir efektīvas. Tāpēc PCR šodien ir viens no drošākajiem un drošākajiem veidiem, kā noteikt infekcijas attīstības sākumposmā.

PCR analīze

PCR (polimerāzes ķēdes reakcija) ir visstraujāk un drošākā metode infekcijas slimību diagnosticēšanai.

Polimerāzes ķēdes reakcijas metodes principu 1983. gadā izstrādāja Kary Mullis. Savam atklājumam K. Mullis 1993. gadā saņēma Nobela prēmiju ķīmijā.

PCR metode ļauj sasniegt nelielu noteiktu nukleīnskābes fragmentu (DNS) koncentrāciju bioloģiskajā materiālā (paraugā). Šī metode ir balstīta uz vairāku selektīvu DNS fragmentu kopēšanu (pastiprināšanu), izmantojot fermentus mākslīgos apstākļos.

PCR diagnostikas metodes kā infekcijas slimību diagnostikas metodes priekšrocības

Tieša patogēnu noteikšana

Daudzas tradicionālas diagnostikas metodes, piemēram, fermentu imūnanalīze, atklāj proteīna marķierus, kas ir infekciozo aģentu būtiskas aktivitātes produkti, kas dod tikai netiešus pierādījumus par infekcijas esamību. Konkrēta patogēna DNS reģiona noteikšana, izmantojot PCR, dod tiešu norādi par patogēna klātbūtni.

Augsta specifika

PCR metodes augstā specifika ir saistīta ar to, ka pētāmā materiālā tiek atklāts unikāls DNS fragments. Specifiskumu nosaka primeru nukleotīdu secība, kas izslēdz iespēju iegūt nepatiesus rezultātus, atšķirībā no imunoloģiskajām analīzes metodēm, kurās bieži sastopamas kļūdas saistībā ar savstarpēji reaģējošiem antigēniem.

Augsta jutība

PCR metode ļauj noteikt pat atsevišķas baktēriju vai vīrusu šūnas. PCR analīze atklāj infekcijas slimību patogēnu klātbūtni gadījumos, kad citas metodes (imunoloģiskas, bakterioloģiskas, mikroskopiskas) nevar to darīt. PCR analīzes jutība ir 10-100 šūnas vienā paraugā (imunoloģisko un mikroskopisko testu jutība ir 103-105 šūnas).

Dažādu patogēnu atklāšanas procedūras universālums

Pētījuma materiāls ar PCR ir patogēna DNS. Metode balstās uz DNS fragmenta vai RNS noteikšanu, kas ir specifisks konkrētam organismam. Visu nukleīnskābju ķīmiskā sastāva līdzība ļauj izmantot vienotas laboratorijas pētījumu metodes. Tas ļauj diagnosticēt vairākus patogēnus no viena bioloģiskā testa.

Augsts analīžu rezultāts

PCR analīzei nav nepieciešams izolēt un audzēt patogēnu, kas aizņem daudz laika. Vienota biomateriāla apstrādes un reakcijas produktu noteikšanas metode un amplifikācijas procesa automatizācija ļauj veikt pilnīgu analīzi 4-5 stundu laikā.

Spēja diagnosticēt ne tikai akūtas, bet arī slēptas infekcijas

PCR metode ir īpaši efektīva, lai diagnosticētu mikroorganismu grūti kultivējamas, nekultivētas un noturīgas formas, kas bieži sastopamas latentās un hroniskās infekcijās, jo šī metode novērš grūtības, kas saistītas ar šādu mikroorganismu audzēšanu laboratorijā. PCR diagnostikas izmantošana arī ir ļoti efektīva pret patogēniem ar augstu antigēnu variabilitāti un intracelulāriem parazītiem.

Cik efektīva ir tuberkulozes krēpu testēšana ar PCR?

Lai identificētu Koch sticks cilvēkiem, tiek izmantotas dažādas diagnostikas metodes. Pateicoties viņam, patoloģiju var atklāt pat sākotnējā stadijā, kas palielina pacienta atveseļošanās iespējas. Tuberkulozes krēpu analīze ir metode, kas ir visaugstāk novērtēta un diezgan efektīva. Kas tas ir un cik liela ir šāda analīze?

Kāda ir krēpu analīze ar PCR?

PCR nozīmē polimerāzes ķēdes reakciju. Šī metode ir efektīva pret infekcijas slimībām. Lai noteiktu skaidru diagnozi, jums nav nepieciešams savākt lielu daudzumu biomateriālu un gaidīt ilgu laiku, piemēram, krēpu sēšanas gadījumā.

Metode balstās uz mikroorganismu daļiņu DNS iegūšanu. Turklāt molekulārā ģenētiskā izpēte noteiks, kāda veida mikroorganismiem ir jābūt pieejamam materiālam. Testa mēģenes apstākļos speciālists sintēzes baktēriju molekulas un izdarīs atbilstošus secinājumus dažu stundu laikā.

Efektivitāte

Mycobacterium tuberculosis krēpu analīze ir efektīva, kad Kochas zizlis ir skāris elpošanas sistēmu. Šajā gadījumā slimība ir viegli identificējama pat pirmajās infekcijas stundās.

Bet, ja tuberkuloze ir klāt, krēpu analīzei nebūs ticama rezultāta:

  • kauli;
  • smadzenes, muguras smadzenes;
  • nervu sistēma;
  • locītavas utt.

Pthisiatrician spēs noteikt slimības veidu, ņemot vērā pašreizējos simptomus un balstoties uz vispārējo un citu analīžu rezultātiem.

Šādai izpētes metodei nav piemērota arī tad, ja pēc slimības terapeitiskās ārstēšanas nepieciešams veikt kontroles analīzi. Rezultāts būs pozitīvs, tāpat kā ķermenī, jebkurā gadījumā joprojām ir dzīvs vai miris IBC. Labāk ir dot priekšroku citai diagnostikas procedūrai.

Metodes kontrindikācijas

Tādā veidā nav kontrindikācijas tuberkulozes krēpu testēšanai, izmantojot PCR. Ir ierobežojumi. Kā minēts iepriekš, nav nepieciešams to veikt pēc tuberkulozes ārstēšanas. Rezultāti nebūs noderīgi. Šeit ir vēlams izmantot citu diagnozi.

Turklāt šai diagnozei nav citu šķēršļu. Sputumu var pārbaudīt jebkurā vecuma kategorijā un ar to saistītām slimībām. Pat ja nav plaša krēpu izdalīšanās, analīzi var veikt, lietojot gļotas, izmantojot bronhoskopiju.

Ieguvumi

Šajā metodē plusi ir šādi:

  1. Augsta specifika un jutīgums. Tiek atklāts tikai tuberkulozes izraisītājs. Ja nav ņemtas vērā visas procedūras nianses, nevar būt nepatiesas atbildes. Mikobaktērijas tiek konstatētas pat tad, ja to minimālais skaits. Pat ja savāktajā materiālā ir 10 patoloģiskas šūnas, infekcija tiks atklāta.
  2. Atbildes saņemšanas ātrums. Cik daudz tiek veikta analīze? Pēc 3-5 stundām var iegūt rezultātu. Nav nepieciešams veikt krēpu kultūru tuberkulozei, un tas samazina laiku.
  3. Jūs varat identificēt kā slēptu infekciju, un to, kas ir akūta.
  4. Nav absolūtu kontrindikāciju. Tas ļauj veikt procedūru ikvienam bez izņēmuma (pat maziem bērniem) un jo īpaši tad, ja nav atrisinātas citas metodes.
  5. Ar PCR diagnostikas palīdzību tiek pētīta cita biomateriāla viela (urīns, izkārnījumi, asinis, siekalas, smadzeņu šķidrums uc).
  6. Šī metode atklāj tuberkulozi agrīnā stadijā, pirmajās stundās pēc inficēšanās.
uz saturu ↑

Trūkumi

Papildus pozitīvajām pusēm ir arī negatīvas. Tas ir:

  1. PCR analīze ir dārgs „prieks”. Turklāt katrā medicīnas centrā nav pieejams aprīkojums, kas nepieciešams tā ieviešanai. Klīnikās tas ir reti sastopams, jo tā vērtība ir arī lieliska. Ja mēs runājam par privātajām klīnikām, tad jā, jūs varat atrast šāda veida diagnozi. Ļaujiet sev, diemžēl, ne visiem.
  2. Tas liecina par viltus pozitīvu rezultātu tiem cilvēkiem, kuri nesen tikuši ārstēti ar tuberkulozi.
  3. Ja MBC ir mutācija, metode var dot arī nepatiesus rezultātus.
  4. Ja materiāls tiek savākts nepareizi, vai speciālistam, kas veic pētījumus, ir nepietiekama kvalifikācijas pakāpe, tad arī iespējama neveiksme. Dažos gadījumos procedūra būs jāatkārto vairākas reizes un katru reizi, kad maksājums tiek atkārtots.
uz saturu ↑

Sagatavošanās analīzei

Lai materiāls būtu augstas kvalitātes, tas ir jākomplektē pareizi un tam jābūt sagatavotam to pareizi.

Ir daži noteikumi par tuberkulozes krēpu savākšanu. Darbības algoritms ir šāds:

  1. Pat priekšvakarā, vakarā personai ir jādzer atkrēpošanas līdzeklis (ja krēpas aiziet slikti). Pat ja tas nepalīdzēja, ieelpošana jāveic, pamatojoties uz zālēm, kas atšķaidītas un atsvaidzinošas. Ja nav krēpu, pacients ir paredzēts bronhoskopijai. Šīs procedūras laikā tiek veikts pētījuma materiāls.
  2. Iegādājieties speciālu konteineru iepriekš. Tas ir sterils un hermētisks, tāpēc nekas papildus nevar tikt novietots tur, kā arī atvērts iepriekš.
  3. Telpai, kurā krēpas tiks savāktas, jābūt labi vēdināmai. Ir nepieciešams atvērt logus, durvis, ieslēgt pārsegu. Vēl viena laba iespēja ir iegūt svaigu gaisu (piemēram, uz balkonu vai pagalmu).
  4. Tūlīt pirms procedūras, jums ir jābrīdina visi, lai neviens nevarētu ieiet istabā, kur viss notiks. Biomateriālā nedrīkst būt papildu mikrodaļiņu - tas ir svarīgi.
  5. Ēšana pirms picking nav ieteicama.
  6. Mutes un rīkles skalošana.
  7. Siekalas ir izliektas. Tās jaudai vajadzētu būt minimālai.
  8. Ar klepu, cilvēks izņem flegmu un izspiež to sagatavotā traukā. Pēc procedūras cieši aizveriet vāku un ņemiet paraugu uz laboratoriju.

Kā savākt krēpu jāinformē ārsts. Ja pacients nav spiests to darīt pats, tad veselības aprūpes darbinieki ierodas glābšanai. Pārstrādes laikā viņi ievietoja īpašu aizsargmasku. Savākt krēpu būs īpašā telpā, kur svešiniekiem nebūs iespējas. Ja pacients nevar ierasties klīnikā, speciālists ierodas savā mājā un palīdz savākt gļotas.

Ja tiek veikta bronhoskopija, pacients tiek injicēts trahejā ar ierīci - bronhoskopu. Ar viņa palīdzību materiāls tiek uzņemts.

Lai nodrošinātu uzticamību, ir ieteicams veikt analīzi trīs reizes, proti:

  • no rīta tukšā dūšā;
  • pēc pirmo reizi pēc 4-5 stundām;
  • 24 stundas pēc pirmā pētījuma un arī pirms ēšanas.
uz saturu ↑

Kā šī analīze tiek veikta?

Caur tuberkulozes krēpu testu ir tikai daļa no darba. Galvenais priekšā. Daudz kas ir atkarīgs no speciālista sagatavošanas.

Pētījuma gaita ir šāda:

  1. Speciālists turpina iznīcināt DNS primāro struktūru (denaturāciju). Šeit ir divas ķēdes. Augstās temperatūrās tās ir atdalītas.
  2. Nākamajā posmā temperatūra tiek samazināta (atkausēta). Tas ir nepieciešams, lai savienotu DNS virkni ar primer.
  3. Trešais posms ir pagarinājums. Šeit tiek sintezētas nepieciešamās molekulas.
uz saturu ↑

Dekodēšanas rezultāti

Mycobacterium tuberculosis krēpās ar PCR var noteikt vai nē. Pozitīvs rezultāts ir balstīts uz faktu, ka ir Koch, kas biomateriālā satur DNS. Tas liecina, ka persona ir inficēta. Ar negatīvu - 98% no fakta, ka subjekts nav inficēts.

Rādītājus var spriest pēc:

  • kāda patoloģijas fāze (latents vai aktīvs);
  • cik daudz ietekmē ķermenis;
  • vai izvēlētā ārstēšana ir efektīva konkrētā gadījumā.

Paturiet prātā, ka nekas nav rūpīgs. Tāpēc var būt kļūdaini pozitīvs vai viltus negatīvs rezultāts. Lai nodrošinātu pareizību, ieteicams veikt citas diagnostikas procedūras vai PCR veic divas reizes (trīs reizes).

Izmaksu analīze dažādos centros

Jūs varat dot krēpu PCR dažādās klīnikās. Sniegsim vairāku populāru Maskavas centru piemērus ar cenu politiku.

Metodes tuberkulozes krēpu testēšanai

Tuberkulozes krēpu analīze ir iekļauta diagnostikas pasākumu kopumā, kas vajadzīgi, lai noteiktu un noskaidrotu diagnozi. Krēpu saturs palīdzēs izveidot kompetentu ārstēšanas shēmu.

Kā iziet tuberkulozes krēpu testu

Ārsti ir izstrādājuši noteikumus analīzes veikšanai. Siekalas tiek savāktas no rīta, pirms personai ir brokastis. Pirmkārt, pacients veic higiēnas procedūras:

  • zobu emaljas tīrīšana;
  • rūpīgi skalot ar tīru ūdeni mutes dobumā un rīklē.

Tad sāk tūlītēju materiālu piegādi analīzei. Kā nokļūt krēpu testā? Prasības procedūrai:

  1. Sagatavošanās sākas iepriekš, vakarā. Pacients tiek mudināts lietot īpašus medikamentus, kas padarīs plaušu sekrēciju dabiskāku. Tie ir atkrēpošanas un retināšanas savienojumi. Ja šādas procedūras nepalīdz, veiciet inhalāciju ar farmaceitisku sastāvu, kas paredzēts atkrēpošanai.
  2. Sagatavojiet krēpas traukus. Gļotas ir jāvāc sterilos traukos, cieši aizverot.
  3. Pirms pasniegšanas, klejojiet un iespiediet traukā. Siekalu tilpumam nevajadzētu būt lielam, tas prasa krēpu no balsenes. Analīzē mutes dobuma baktērijas ir svešas.
  4. Savāc siekalu telpā ar lielisku ventilāciju. Analīze tiek veikta, atverot atloku, vadot pārsegu. Ir ieteicams atvērt logus vai iziet svaigā gaisā.

Procedūras laikā telpā ir aizliegts iebraukt. Ārēji var dot ieguldījumu biroja mikroflorā un līdz ar to arī krēpās, patoloģiskajos veidojumos. Medicīnas darbinieki saņem analīzi īpašā maskā (respiratorā).

Tuberkulozes transkripta krēpu analīze

Dekodēšana sākas ar gļotu izskatu. Patoloģija raksturo krāsas maiņu - tā kļūst tumša, ar redzamiem asins piemaisījumiem. Krāsa nav galvenais indikators. Sputum kļūst tumšs, dzerot sarkanvīnu, kafijas aizraušanās. Dažas zāles un krāsaini dzērieni maina gļotu izskatu.

Savākto materiālu atšifrē divi rādītāji, proti, ārsti iegūst divus rezultātus:

Pozitīva atbilde

Iegūto krēpu analīze apstiprina slimības klātbūtni organismā. Kas apstiprina šo:

  • svešķermeņi vai nezināmi ieslēgumi;
  • gļotu recekļu klātbūtne;
  • redzamās svītras;
  • nepatīkama strutaina vai infekcioza smaka;
  • strutas.

Makroskopiskā pētījuma metode sniedz citus datus:

  • fibrīniskās konvulsijas;
  • Koch objektīva nūju veidojumi;
  • baktēriju vielu sadalīšanās produkti;
  • patoloģiskā procesa paliekas plaušu audos.

Pozitīvs rezultāts liecina par palielinātu olbaltumvielu savienojumu daudzumu. Tas sasniedz 100-120 g / l.

Vēl viena mikroskopiskā metode ļauj identificēt citus bīstamus elementus:

  • alveolāri makrofāgi;
  • pārvērtēts leikocītu sastāvs;
  • augsts limfocītu skaits.

Attiecībā uz tuberkulozi persona bieži cenšas izspiest muti. Hemoptīze palielina sarkano asins šūnu veidošanos. Siekalu skaits mutē ir tāds, ka cilvēks to nevar norīt bez pamanāmības. Tas ir vairāk nekā veselīgā stāvoklī.

Negatīva atbilde

Pētījums rāda, ka leikocītu skaits ir neliels, atbilst normai. Mikrobaktērijas arī nav konstatētas. Ja pacients jūtas ne vesels, tad speciālists noteiks papildu pārbaudi. Iespējams, ka slimība ir saistīta ar plaušu slimībām. Papildu diagnostikas veidi un metodes ir atkarīgas no pacienta simptomiem un stāvokļa.

Kā tiek veikta gļotu izpēte

Tuberkuloze ir bīstama patoloģiska iedarbība uz plaušu audiem, novērota to sadalīšanās. Analīze tiek veikta ar vairākām metodēm. Visbiežāk - ELISA (imunoloģiskā pārbaude). Metodes būtība:

  1. Antivielas pievieno šķīdumam, kurā tiek ievietota daļa krēpu.
  2. Pārbaudiet antigēnu koncentrāciju, salīdzinot ar veselīga ķermeņa normu.
  3. Nosakiet patoloģiskās vides aktivitāti.
  4. Diagnosticējiet.

Laboratorijas pētījumu otrā versija ir ATKRITUMI. Metodei izmantojiet īpašu medicīnisko aprīkojumu. Aparatūras izpētes būtība:

  1. Krēpu injicētajā mikrovides vidē paredzētais infekcijas veids.
  2. Aparāts sāk augt noteiktos baktēriju temperatūras celmos.
  3. Procesā rodas oglekļa dioksīds, un sensori to uztver.
  4. Gāze apvienojas ar krāsu.
  5. Fluorescences indeksā izdariet secinājumus par slimības veidu.

Vieglākais veids ir kultūras. Flegma sēta īpašā vidē. Ārsts izskata mikrobu veidojumu koloniju veidus. Šī metode ir garākā, bet ļauj pierādīt diagnozi. To lieto ļoti reti, tieši tāpēc, ka tas ir ilgu laiku, kas ne vienmēr ir piemērots pacientam.

Tuberkulozes krēpu analīzes analīze

PCR ir medicīniskā termina polimerāzes ķēdes reakcijas saīsinājums. Diagnostika ir viens no jaunākajiem zinātnieku sasniegumiem. Tā tika atklāta 1983. gadā, atklāšanas nozīmi novērtē pasaulē, zinātnieks saņēma visaugstāko atzinību - Nobela prēmiju.

Metode balstās uz gēnu inženierijas izmantošanu. Tā daudzpusība, kad nepieciešams neliels materiāla daudzums precīzai diagnostikai. Identificēt infekciju ar tuberkulozi ir patiešām agrīnās infekcijas stundās, negaidot slimības attīstību.

Metodes, kas ir polimerāze, būtība:

  • pacients ņem DNS daļiņu fragmentu;
  • veikt materiāla bioloģisko sintēzi;
  • nosaka mikroorganismu klase.

Process ir tehnoloģiski sarežģīts, tas ietver molekulāro ģenētisko pārbaudi. PCR tuberkulozei ir burtiski pāris stundas. Laiku, kas vajadzīgs citām metodēm, nevar salīdzināt ar viņu ātrumu. Pēc analīzes pacients gaida izraisītāja atklāšanu. Saprot tikai procesu, kas ir tikai speciālista pamatā. Parastā persona nesaprot metodes sarežģītību.

Kā tuberkulozes testu diagnostika:

  1. Veikt analīzei nepieciešamo materiālu. Kas tas varētu būt: asinis, kuņģis, krēpas, ūdens, mazgāti ar bronhiem.
  2. Materiāla veids tiek izvēlēts atkarībā no iespējamā infekcijas veida.
  3. Nākamais solis ir ķēdes savienojuma izpēte. Divas ķēdes ir pakļautas augstai temperatūrai līdz 98 grādiem. Posmu sauc par denaturāciju (strukturālās DNS ķēdes iznīcināšanu). Temperatūras ekspozīcijas laiks - līdz 2 minūtēm.
  4. Nākamais posms ir anulēšana. Temperatūra tiek samazināta, primer ir atļauts savienoties ar DNS virkni.
  5. Tā rezultātā notiek pagarināšanās - procesam nepieciešamo molekulu sintēze.

Šādai analīzei ir nepieciešama īpaša iekārta. Tas ir dārgs, tāpēc tas nav pieejams nevienā veselības aprūpes iestādē. PCR tiek veikts sarežģītos gadījumos, kad nav precīzu rezultātu parastajām diagnostikas metodēm, nav iespējams veikt instrumentālas metodes pacienta stāvokļa pārbaudei.

PCR tehnoloģijas priekšrocības:

  1. Rezultāta iegūšanas ātrums. Aptuveni 5 stundas ārstam ir precīzi dati. Šis ātrums ļauj jums palīdzēt pacientam ārkārtas situācijā. Biežāk tas ir pirmsoperācijas periods.
  2. Atļauts, ja nevar izmantot citas metodes. Piemēram, bieža rentgena staru atkārtošana rada radiāciju. PCR nav bīstams pacientam.
  3. Jūs varat izpētīt jebkuru bioloģisko vidi. Ir identificētas pat sarežģītas tuberkulozes formas.
  4. Tāpēc metode ir droša bērniem.
  5. Infekcija tiek atklāta jebkurā stadijā.
  6. PCR neļauj slēpt pat nelielu skaitu baktēriju mikroformāciju.
  7. Piemērots tuberkulozes iespējamās atkārtošanās pārbaudei.

Cik daudz tuberkulozes krēpu analīzes

Paraugus ņem vairāk nekā vienu reizi. Atkārtojumi izslēdz kļūdu iespējamību vai iegūst sliktas kvalitātes materiālu, kas neatspoguļo pacienta patieso stāvokli un stāvokli. Cik reizes savākt krēpu, pastāstiet ārstam. Labākais risinājums ir trīs reizes dienā. Dažreiz var būt nepieciešami papildu paraugi. Kādā laika periodā tie tiek savākti:

  1. Pirms ēšanas no rīta.
  2. 3-4 stundas pēc pirmā testa.
  3. Otrajā dienā, arī pirms ēšanas.

Tuberkuloze ir bīstama slimība, kas var ietekmēt jebkuras personas ķermeni. Ir daudz infekcijas gadījumu. Ja ir aizdomas par infekcijas iespējamību, negaidiet spilgtus simptomus. Tas ir jāpārbauda, ​​jāpārbauda un savlaicīgi jāuzsāk.

Tuberkulozes PCR diagnoze bērniem un pieaugušajiem: indikācijas

Pasaules Veselības organizācija pirms 20 gadiem atzina, ka tuberkulozes izplatīšanās ātrums nav kontrolēts un sasniedzis epidēmijas mērogu. Kopš tā laika situācija nav uzlabojusies. Katru gadu tiek diagnosticēti vairāk nekā miljons slimības gadījumu, no kuriem gandrīz ceturtā daļa ir letāla. Pēdējā desmitgadē biežums bērnu vidū ir palielinājies, vairums slimības formu nav piemērotas standarta antibiotiku terapijai.

Šodien viens no globālajiem uzdevumiem medicīnā ir tādu diagnostikas metožu izstrāde, kas ļaus identificēt patoloģiju pirms izteiktu klīnisko simptomu rašanās. Viens no tiem ir polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) tuberkulozei, kas palīdz atklāt Koch slimību izraisošos stieņus asinīs, krēpās un citos bioloģiskos šķidrumos.

Tuberkulozes diagnostika

Skrīninga testi ir vērsti uz pacientu, tuberkulozes nesēju un infekcijas izplatības novēršanu sabiedrībā. Bērniem līdz 14 gadu vecumam Mantoux tests tiek plaši izmantots. Tas ir imunoloģisks tests, kurā tuberkulīna deva tiek injicēta subkutāni - sarežģīts vairāku mikobaktēriju veidu ģenētiskā materiāla maisījums. Izteiktās reakcijas parādīšanās norāda uz aktīvo infekcijas procesu.

Profilaktiskajai pārbaudei pieaugušajiem, izmantojot fluorogrāfiju vai rentgenstaru. Šīs metodes palīdz vizualizēt patoloģiskos bojājumus plaušu audos. Tomēr tas rada grūtības diferencēt tuberkulozi no citas organiskas patoloģijas (ļaundabīgi un labdabīgi audzēji, iekaisuma procesi, parazītu invāzijas, profesionāls plaušu bojājums).

Lai noskaidrotu patoloģiskā fokusa struktūru un lielumu, var būt nepieciešami papildu instrumentālie pētījumi:

  • mērķtiecīga radiogrāfija;
  • datortomogrāfija;
  • magnētiskās rezonanses attēlveidošana.

Tuberkulozes diagnostikas metodes

Šaubu gadījumā un atbilstošas ​​terapijas iecelšanai ir vajadzīgas precīzākas diagnostikas metodes, kas ļauj izolēt patogēnu. Lai apstiprinātu tuberkulozes plaušu formu, ilgstoši tiek izmantota krēpu mikroskopiskā un bakterioloģiskā izmeklēšana.

Pēdējos gados biežāk sastopami dažādi orgāni un sistēmas - nieres, kauli, zarnas, āda - mikobaktēriju sastopamība. Lai identificētu šīs tuberkulozes formas, var izmantot ultraskaņas pārbaudes, urīna un izkārnījumu kultūru, endoskopijas izmeklējumus.

PCR diagnostika tuberkulozei palīdzēs apstiprināt Koch klātbūtni asinīs, kā arī tās jutību pret noteiktām zālēm. Šī ir ļoti efektīva metode, kas balstīta uz baktēriju ģenētiskā materiāla noteikšanu dažādos bioloģiskos šķidrumos.

Specifiskums un norādes

Polimerāzes ķēdes reakcija ir ļoti jutīga mikrobioloģiskā diagnostikas metode, kas balstās uz ģenētiskās inženierijas principiem. Lai apstiprinātu patogēna klātbūtni bioloģiskajā materiālā, pietiek ar to noteikt unikālu nukleīnskābes fragmentu. PCR tuberkulozei var noteikt baktērijas asinīs, krēpās, urīnā.

Šobrīd izstrādātas vairākas analīzes metodes. Vispopulārākie no tiem ir šādi:

  • Reāllaika PCR;
  • mikrofluīdu tehnoloģija;
  • sekvencēšana un piroekvenēšana.

Reālā laika PCR

Laboratorijas visbiežāk izmanto reālā laika polimerāzes ķēdes reakciju, jo samazina viltus pozitīvo rezultātu skaitu, un pats analīzes process aizņem īsu laiku.

Ņemot vērā slimības slēpto formu lielo skaitu un standarta diagnostikas metožu neefektivitāti, PCR arvien vairāk tiek izmantots. Šīs analīzes mērķis ir parādīts:

  • apzināt aizdomīgus apgabalus uz rentgena;
  • šaubīgi tuberkulīna testa rezultāti;
  • neiespējamība veikt krēpu mikroskopisku un bakterioloģisku analīzi cilvēkiem nopietnā stāvoklī;
  • veikt ķirurģiskas iejaukšanās, ja ir nepieciešams ātri nodrošināt infekcijas trūkumu;
  • fluorogrāfijas, rentgenstaru vai datortomogrāfijas izmantošanas nepieņemamība (piemēram, grūtniecēm un barošanai ar krūti, pārmērīga starojuma iedarbības gadījumos);
  • aizdomas par ekstrapulmonālo tuberkulozi (ieteicams lietot ne tikai asinis, bet arī flegma).

Tuberkulozes PCR diagnostika sevi pierādījusi bērnu pārbaudē, jo trūkst papildu ekspozīcijas un ātru rezultātu.

Sagatavošanas un analīzes procedūra

Īpaša sagatavošanās asins PCR nav nepieciešama. Tomēr, lai izvairītos no asins paraugu ņemšanas sarežģījumiem un lai iegūtu augstas kvalitātes materiālus, jāievēro šādi vispārīgi noteikumi:

  • analīze jāveic rītā ne agrāk kā 2 stundas pēc pamošanās;
  • Tai būtu jāierobežo tauku un ceptu ēdienu uzņemšana dienā pirms asins paraugu ņemšanas;
  • atturēties no ēšanas, tējas un kafijas 8-9 stundas, tas ir atļauts dzert tīru ūdeni;
  • Nedrīkst smēķēt vismaz 3-4 stundas.

Pastāvīgo medikamentu gadījumā (hormoni, antikoagulanti, pretiekaisuma līdzekļi, antibiotikas, asins atšķaidītāji) par to ir jāinformē laboratorijas palīgs.

Pēc krēpu ievadīšanas jums jātīra zobi un vairākas reizes izskalojiet muti. Savākt materiālu sterilā traukā. Lai iegūtu labākus rezultātus, vakarā var lietot atsperojošu vai mukolītisku līdzekli.

Pati diagnoze sastāv no vairākiem posmiem.

    Žogu materiāls. To var veikt laboratorijā un attālināti. Daži materiāli, ko pacients savāc neatkarīgi (urīns, flegma).

Nukleīnskābju struktūras iznīcināšana (DNS un RNS molekulu denaturācija). Lai to izdarītu, testa materiāls tiek sasildīts līdz 98 grādu temperatūrai un tiek turēts vairākas minūtes. Rezultātā dubultā spirāles atloka, veidojas viendaļīgas molekulas.

  • Rūdīšana Pēc primera pievienošanas (īsa nukleīnskābes daļa), temperatūra samazinās par vairākiem grādiem, aktivizējas polimerāze.
  • Atzīšana. Temperatūra tiek sasniegta optimālā līmenī, enzīmu aktivitāte sasniedz maksimumu un otrā ķēde ir pabeigta saskaņā ar Chargaff noteikumu par komplementaritāti.

    • Lai pabeigtu pētījumu, ir nepieciešams sintezēt nepieciešamo skaitu DNS molekulu - aptuveni 50 ciklu iepriekšminētās reakcijas. Tas aizņem apmēram 2-3 stundas. Pozitīvs reakcijas rezultāts ne vienmēr norāda uz aktīvo slimības stadiju, bet gan liecina par mikroorganisma klātbūtni organismā.

    Metodes priekšrocības un trūkumi

    Salīdzinot ar citām mikrobioloģiskajām metodēm, PCR nav nepieciešams ilgs laiks, lai noteiktu Mycobacterium tuberculosis, izmantojot PCR, rezultātu var iegūt testēšanas dienā.

    Vēl viena priekšrocība ir analīzes augsta specifika, kas ļauj konstatēt patogēna klātbūtni ar precizitāti 90-95% gandrīz jebkurā biomateriālā (asinīs, urīnā, izkārnījumos, smadzeņu šķidrumā, krēpās, bronhu pietvīkumā).

    Tomēr metodei ir vairāki trūkumi:

    • samērā liels viltus pozitīvu rezultātu (līdz 15%) īpatsvars, kas saistīts ar dzīvu mikroorganismu noteikšanu;
    • dažos gadījumos jūs varat izlaist slimības faktu, jo Mycobacterium tuberculosis bieži tiek pakļautas mutācijām un to ģenētisko materiālu izmaiņām;
    • zema efektivitāte cilvēkiem ar imūndeficītu;
    • augstām pētniecības izmaksām, nepieciešamībai pēc dārgām iekārtām un reaģentiem.

    Ko var aizstāt?

    Ņemot vērā tuberkulozes infekcijas veidu dažādību, precīzāku diagnozi un ārstēšanas izvēli, ir nepieciešams apvienot vairākus diagnostiskos pētījumus:

      Obligāta analīze bērniem ir Mantoux tests. Ja tuberkulīna ievadīšana (mikobaktēriju ģenētiskais materiāls) ir izteikta reakcija, var pieņemt, ka tas ir inficēts ar tuberkulozes bacillus.

    Lai vizualizētu patoloģisko fokusu, var izmantot rentgena metodes. Ekstrapulmonālās tuberkulozes diagnozē tiek izmantotas endoskopiskās metodes ar vienlaicīgu biopsiju:

    • bronhoskopija palīdz identificēt balsenes, trahejas, bronhu bojājumus;
    • kolonoskopija - zarnas;
    • cistouretroskopija - urīna sistēmas orgāni;
    • histeroskopija - sieviešu dzimumorgāni. Šīs metodes nav specifiskas, lai precīzi noteiktu diagnozi, ir jānosaka patogēns.

    Vispārējie klīniskie testi palīdzēs precīzāk noteikt ķermeņa stāvokli. Ir nepieciešama pilnīga asins analīze ar leikocītu formulu.

    Neitrofilo leikocītu skaita pieaugums ar samazinātu limfocītu līmeni un eritrocītu sedimentācijas ātruma (ESR) pieaugums norāda uz aktīvo bakteriālās etioloģijas iekaisuma procesu. Lai izslēgtu urīna sistēmas orgānu bojājumus, izmantojot vispārēju urīna analīzi un sterilitātes kultūru.

    PCR pašlaik ir pieejams lielākajā daļā privāto laboratoriju. Tas prasa ne tikai augsti kvalificētus speciālistus, bet arī dārgas iekārtas, lielu skaitu reaģentu. Tāpēc šīs metodes izmantošana ir ierobežota, neskatoties uz tās augsto precizitāti un specifiskumu.

    PCR (a) priekšrocības un trūkumi tuberkulozes diagnosticēšanai

    Cilvēka audos un struktūrās daudzus gadus ir bijusi specifiska tuberkulozes infekcija, un noteiktos apstākļos tā izplatās ātri visā ķermenī 2-3 mēnešu laikā. Dažreiz vislabāko ārstēšanas kursu ir ļoti grūti izvēlēties, jo vēl ir diagnosticēta un patogēna ir pielāgota daudzām zālēm.

    Jaunākā tuberkulozes PCR diagnoze palīdz atklāt ne tikai attīstīto slimību, bet arī pašu patogēnu, kad vēl nav parādījušās pirmās slimības pazīmes.

    Kas ir PCR?

    Nesen parādījās tuberkulozes diagnostika, izmantojot PCR. 1983. gadā mikrobiologs no Amerikas, Cary Mullis, izgudroja procedūru, ar kuru mikroorganismus var atjaunot no bioloģiskā materiāla īsā segmentā. Šis darbs ir ieguvis Nobela prēmiju.

    PCR tuberkulozei ir polimēru ķēdes process, kurā diagnosticē un atklāj vīrusu patogēnus ar gēnu inženierijas palīdzību. Šo metodi izmanto imunoloģiskās, mikrobioloģiskās, viroloģiskās un bioķīmiskās laboratorijās.

    Universālā metode palīdz ārstiem diagnosticēt un identificēt infekcijas procesu pat pēc pirmajām inficēšanās stundām, ilgi pirms simptomu rašanās. Pētniecība ir iespējama pat ar nelielu biomateriāla daudzumu.

    Kas ir nepieciešams analīzei?

    • Vairāki DNS segmenti (primeri), ar kuriem sākas bioloģiskā sintēze;
    • Nukleotīdu savienojumi, DNS molekulas vai RNS pamats;
    • Polimerāzes enzīms, kas paātrina PCR analīzi.

    Kāda ir metodes pamatā?

    Pirmkārt, DNS segmentu iegūst no inficētas personas biomateriāla, izmantojot gēnu molekulārās biosintēzes metodes, turpmāk tiek noteikts mikroorganismu veids, kam pieder biofragments.

    Šī sarežģītā reakcija aizņem mazāk laika nekā daži biometodi. PCR nosaka patogēnu dažu stundu laikā, bet nav nepieciešams to izolēt no bioloģiskā šķidruma (krēpas, smadzeņu spraugas vai asins barotnes), nav nepieciešams to ilgu laiku audzēt barības vidē. Pietiek ar to, ka pētītais materiāls satur infekcioza patogēna DNS virkni.

    Veicot PCR asins analīzi tuberkulozei in vitro, mākslīgi tiek radīta mikobaktēriju tuberkulozes ribonukleīnskābes sintēze.

    Diagnozes posmi

    Molekulārā reakcija, izmantojot PCR, ir vienkārša procedūra, kas aizņem maz laika. Nepieciešamā biomateriāla ieguve: tbc noteikšanai tiek izmantots asinis, krēpas, bronhu mazgāšanas šķidrums.

    1. Pirmkārt, DNS primārā forma tiek iznīcināta, 2 ķēdes tiek atdalītas augstā temperatūrā (ne vairāk kā 98 ° C ne vairāk kā 2 minūtes);
    2. Tad tiek veikta anulēšana, primāro temperatūru samazina vairāki sadalījumi, DNS daļa ir piesaistīta primeram;
    3. Nākamais posms tiek saukts par pagarināšanos, ar nepieciešamo molekulāro struktūru biosintēzi.

    Lai iegūtu nepieciešamo DNS kopiju skaitu, jāiztur no 25 līdz 30 šādiem cikliem, un iegūtais mikobaktēriju skaits ir viegli atpazīstams.

    Vai ir nepieciešams veikt PCR tuberkulozei?

    Tieši visiem pacientiem, kuriem ir aizdomas par TVC, ķēdes diagnostika netiek veikta, jo procedūra prasa dārgas iekārtas. Ne visas medicīniskās valsts iestādes ļauj to iegādāties, jo īpaši tāpēc, ka parastās metodes mycobacterium tuberculosis diagnosticēšanai ir arī informatīvas.

    • Rūpīga vēsture, pacients iztaujājot;
    • Ārējā pārbaude;
    • Mantoux tuberkulīna tests;
    • Radiogrāfiska vai fluorogrāfiska pārbaude;
    • Ja nepieciešams, datora diagnostika;
    • Maska ar krēpu mikroskopisku vai bakterioloģisku pārbaudi.

    PCR tuberkulozei tiek veikta tikai tad, ja nav iespējams veikt citu instrumentālo analīzi vai apstākļos, kurus ir grūti diagnosticēt.

    Neskatoties uz to, ka ir izgudrots liels skaits diagnostikas metožu, turpina pieaugt tuberkulozes slimnieku skaits. Turklāt biežums ir ieguvis dažas iezīmes: bieži novēro smagu slimības formu, palielinās nāves gadījumu skaits, patogēns kļūst rezistents pret esošajām ķīmijterapijas zālēm.

    Daudzi cilvēki nevēlas katru gadu veikt ikdienas pārbaudi, atsakās no vakcinācijas, kas izraisa biežuma palielināšanos. Šādiem apstākļiem ir nepieciešamas efektīvas un informatīvas izpētes metodes, kas pieejamas pieaugušajiem un bērniem, kuriem diagnosticēta tbc. PCR ir priekšrocības salīdzinājumā ar citām diagnostikas metodēm.

    Kāda ir metodes vērtība?

    Šis jaunākais pētījums ir pierādījis sevi labi. Ja vairāku iemeslu dēļ ir grūti veikt diagnozi vai dažos pretrunīgos gadījumos PCR vieglāk atklāj tuberkulozes bioloģisko materiālu nekā citas metodes.

    • Šis ātrais pētījums, neliels molekulas segments ļauj īsā laikā veikt precīzu diagnozi aptuveni 5 stundu laikā, to lieto ārkārtas gadījumos, piemēram, pirms steidzamas ķirurģiskas iejaukšanās;
    • Asins analīzes tuberkulozei ir iespējamas, ja citas metodes nav pieejamas vai ir kontrindicētas - dažreiz tbc patogēna noteikšanai ir jāveic daudzi Rg-šāvieni, radiācijas deva ir pārāk liela;
    • Izmantojot polimerāzes reakciju, jebkurus bioloģiskos šķidrumus var pārbaudīt attiecībā uz mikobaktēriju klātbūtni. Piemēram, jūs varat veikt pētījumu par cerebrospinālajiem šķidrumiem ar tuberkulozo meningītu vai urīnu ar urogenitālu tuberkulozi;
    • Metode ir droša, tuberkulozes diagnoze bērniem, kas lieto PCR, nerada grūtības;
    • Polimēra reakcijas metode atklāj tuberkulozes bacillus jebkurā slimības formā un stadijā;
    • Tikai dažu baktēriju klātbūtne biomateriālā ļauj jums redzēt mikroorganismu klātbūtni, jo tā ir jutīga reakcija;
    • PCR viegli diagnosticē slimības atkārtošanos.

    Neskatoties uz milzīgo priekšrocību skaitu, visi pacienti, kuriem ir aizdomas par BBC pētījumu, netiek veikti, jo ir arī trūkumi, tie tiek ņemti vērā.

    Video

    Video - agrīna diagnostika

    Kādi ir trūkumi?

    Šī diagnozes metode ir diezgan izņēmuma, nekā dabiska, jo tam ir iemesli. Pirmkārt, tiek ņemtas vērā metodes augstās izmaksas. Iekārta ir dārga, sabiedriskajām klīnikām nav iespējas to iegādāties augstās cenas dēļ, bet lielākā daļa apmaksāto laboratoriju ir aprīkotas, tās tiek analizētas.

    • Šī metode nosaka mirušās baktērijas, kas mirušas pēc ārstēšanas, bet PCR ir pozitīvs rezultāts. Tūlīt pēc ķīmijterapijas nav jēgas veikt pētījumu, jo rezultāts būs neuzticams;
    • Mycobacterium tuberculosis mutācijas ir jutīgas, kas noved pie metodes neefektivitātes, un DNS virkni nevar sintezēt konsekventi.

    Pētījuma vide ir rūpīgi jāizvēlas, asinis vai urīnu var savākt tikai tad, ja ir aizdomas par infekciju. Sputum nevajadzētu lietot izmeklēšanai, ja ir aizdomas par kaulu tuberkulozi. Šādā gadījumā diagnoze būs nepareiza.

    Pacientu ar tuberkulozi asinis un urīnu, kas jāpārbauda par PCR, reti lieto, slimības identificēšana šādā veidā ir apšaubāma. Šajos bioloģiskajos barotnēs patogēns tiek noteikts tikai sepsi vai izplatītās tuberkulozes gadījumā. Visbiežāk sastopamas lokālas formas, to asinis un urīns var palikt nemainīgi. Visbiežāk pārbaudei tiek izmantota flegma.

    Kas parāda analīzi?

    Lielākā daļa pacientu tiek nosūtīti PCR diagnostikai pretrunīgos un sarežģītos tuberkulozes gadījumos. Kad medicīnas profesionāļi izsniedz pētījumus?

    1. Ja ir kontakts ar personu, kurai ir ticami diagnosticēta tuberkuloze, bet ir grūti diagnosticēt, izmantojot parastās metodes;
    2. Šādos apstākļos, ja pacients klīniku nodrošina, nav iespējams veikt rentgenogrāfiju vai citus pētījumus. Šādā situācijā to ir vieglāk pārbaudīt, izmantojot polimēra metodi. Krēpu analīzi vienkārši nogādā laboratorijā īpašā traukā, un rezultāts kļūst zināms pēc dažām stundām;
    3. Pirms operācijas steidzami nepieciešams noteikt, vai pacients ir slims ar tuberkulozi, un šajā gadījumā ir norādīts PCR;
    4. Metodes drošības dēļ iespējams veikt grūtnieces vai bērna aptauju, neradot papildu rentgena slodzi;
    5. Apšaubāmi Mantoux testa rezultāti.

    Ikviens, kas vēlas, var tikt pārbaudīts par maksu, ja tuberkuloze nav apstiprināta ar bakterioloģijas un fluoroskopijas palīdzību. Tas notiek, ja plaušu audu bojājums tiešā projekcijā ir neredzams Rg attēlā, un pacients nespēj pareizi savākt krēpu, bet cilvēka tuberkulozes pazīmes ir traucētas.

    Mūsdienu PCR reakcija diagnostikai ir atslēga veiksmīgai ārstēšanai, kā rezultātā samazinās slimības izplatība. Tradicionālās slimību noteikšanas metodes ne vienmēr rada vēlamo efektu.

    Līdz ar to līdz šim PCR analīze ir kļuvusi par vienu no drošām un drošām diagnostikas metodēm slimības agrīnajos posmos.

    Papildu Raksti Par Laringīts